酵母Spo11是一个减数分裂的特异性蛋白质,是催化减数分裂同源重组的关键蛋白质。已有的结果表明Spo11是II型拓朴异构酶(TopVI)的催化亚基A的同源蛋白,但在酵母和动物基因组中未发现该拓朴异构酶的B亚基基因。我们实验室的前期研究证明水稻基因组中至少有三个SPO11基因和一个TOPVIB基因。基于此,本课题将利用原位杂交分析这四个基因在水稻生殖器官、营养器官表达的组织(细胞)特异性;利用酵母双杂交分析OsTopVIB与三个OsSpo11蛋白的互作关系;用反义基因(或RNAi)技术分析OsSPO11s和OsTOPVIB在水稻生殖发育和营养器官发育中的功能。以揭示高等植物与酵母和动物减数分裂基因调控机制的差异,以及以减数分裂为核心的生殖发育与营养器官发育的协调关系,为全面认识减数分裂的基因调控机理和减数分裂基因功能的多样性提供新的入手点。
酵母Spo11是减数分裂所必需的重要蛋白质因子,研究结果表明,Spo11是TopVI(古细菌中发现的一种II型拓扑异构酶,由A、B两个亚基组成)A亚基的同源蛋白,我们实验室的研究表明,在单子叶植物水稻中至少有3个SPO11(OsSPO11-1、2、3)和一个TOPVIB(OsTOPVIB)同源基因。本课题利用半定量RT-PCR分析了OsSPO11-2、3和TOPVIB的时空表达特异性,用原位杂交技术分析OsSPO11-3和TOPVIB在生殖器官与营养器官中表达的组织(细胞)特异性,发现OsSPO11-3和TOPVIB的表达模式比较相近,二者的功能联系可能比较密切。利用酵母双杂交研究分析了OsTopVIB与三个OsSpo11蛋白间的互作关系,发现三个OsSpo11均可与OsTopVIB相互作用,已得到这三个OsSpo11的可溶性蛋白,以进行生化活性的鉴定。并获得了OsSPO11-3和TOPVIB的RNAi转基因植株以进行生理功能研究。