中文摘要：

核内mRNA降解是基因多种水平调控的重要一个环节。但由于技术手段及检测模型的缺乏，目前对其具体的作用机制还不甚了解。我们在前期对腺病毒主要晚期转录单位poly(A)位点的交替使用机制的研究过程中，发现了L1的poly(A)位点上游有一个RNA抑制元件通过影响核内mRNA的稳定性来有选择地控制基因的表达及poly(A)位点的使用。一组分子量大小为30Kd的蛋白，p30,可与URE特异性结合，因此很有可能参与URE介导的核内mRNA降解。为明确p30蛋白在核内RNA降解中的作用，本研究我们将采用串联质谱及酵母三杂交等方法以获取p30编码序列。并进行体外功能检测。利用腺病毒poly(A)转换为模型系统对核内mRNA降解机制进行研究，将对基因调控的整体水平的认识起积极的推动作用。

结论摘要：

在腺病毒主要晚期转录单位(MLTU)上共有5个(L1到L5)多聚腺苷酸(polyA)位点，并呈现polyA位点转换的现象，即早期感染转录水平低并以L1为主，而晚期感染转录水平升高并且5个位点使用水平相当。利用L13串联模拟基因系统，我们发现L1polyA位点的上游存在一个新的RNA抑制元件，URE。该元件可通过选择性地引发mRNA降解来调控polyA位点的转换。为此，利用构建缺失体的方法我们进一步明确URE内至少存在有两个不同功能的亚元件，一个控制基因表达水平，另一个控制polyA位点的转换。此外，利用酵母三杂交的方法，我们共调出7个潜在的URE相互作用蛋白。其中有5个阳性克隆为编码Hax1蛋白的cDNA片段。我们成功构建了Hax1真核表达质粒，并将URE成功插入pGL3荧光酶报告质粒的3'末端，即SV40 polyA位点上游。共转染Hax1后，我们发现URE对pGL3荧光酶活性具有显著的抑制效应，并呈现Hax1剂量依赖性特点。我们的实验结果为进一步寻找与明确腺病毒polyA位点转换的作用机制奠定重要的实验基础。