中文摘要：

趋化因子RANTES在器官移植排斥反应中发挥重要作用，抑制RANTES及其受体通路能够阻止急性排斥反应的进程。最近发现，RANTES实现对白细胞的趋化作用依赖于其与GAG的相互作用。新近发现的一种天然RANTES突变体S24F是RANTES的有效拮抗剂，可能参与趋化因子网络的调节。本项目拟在体外和体内分别采用腺病毒和超声微泡介导的基因转染方法，在微血管内皮细胞及其周围基质表达S24F，通过竞争性结合内皮细胞表面和基质的GAG结合位点干扰RANTES/GAG相互作用，在移植物局部阻断RANTES及其受体通路，观察其对白细胞募集及移植免疫排斥反应的影响。进一步丰富趋化因子在移植免疫排斥反应中作用的理论基础，为治疗排斥反应提供的新思路。

结论摘要：

调节活化正常T细胞表达分泌因子(RANTES)又名趋化因子配体5 (CCL5)在心脏移植排斥反应中扮演着重要角色。拮抗RANTES的生物活性能减少其对白细胞的招募从而减轻移植物排斥反应程度。新近发现的一种天然RANTES突变体S24F是RANTES的有效拮抗剂，可能参与趋化因子网络的调节。在本研究中，我们构建含S24F目的基因过表达腺病毒载体来观察S24F基因在白细胞募集和移植排斥反应中的作用与影响。在体外穿内皮趋化实验，分别比较RANTES和S24F诱导的外周血单个核细胞穿内皮趋化指数。在体内小鼠心脏移植模型中，BALB/C作为供体心脏，经主动脉根部分别灌注含S24F基因腺病毒液(Ad-S24F)、空载病毒液(Ad-Null)及PBS液，然后再异位移植到受体C57BL/C腹部，观察移植物存活时间变化。通过免疫组织化学和实时定量多聚酶链式反应检测移植物中浸润的白细胞及相关炎症细胞因子表达情况。通过上述方法，我们观察到（1）成功体外培养人脐静脉内皮细胞，并构建了含S24F目的基因腺病毒载体，且在体外穿内皮趋化实验中发现RANTES诱导的外周血单个核细胞穿内皮趋化指数能够被S24F所抑制(Ad-S24F组 9.2%±0.02, Ad-null组 17.7%±0.02, 空白对照组 15.1%±0.01; p<0.05)；（2）通过转染效率及目的基因局部表达分析，经供体主动脉根部灌注含S24F腺病毒液方法优于超声微泡介导含S24F质粒转染。但超声微泡介导含目的基因S24F的腺病毒载体转染移植小鼠心脏的实验条件仍需要进一步探索。（3）经供体主动脉根部灌注等量含S24F基因腺病毒液(Ad-S24F)相比较空载病毒液(Ad-Null)和PBS液，能够延长心脏移植物存活时间(Ad-S24F 11.63±1.59天, Ad-Null 9.38±1.69天 和PBS液9.00±1.07 天, P < 0.05)；（4） S24F基因转染能减轻移植物CD8 T淋巴细胞、单核巨噬细胞及T细胞受体αβ+细胞的浸润，并降低内源性RANTES及IFN-γ转录水平。上述结果证实了S24F是趋化因子网络的重要组成部分，参与并调控RANTES的生物活性，为移植物排斥反应的防治提供一个新的靶点。