核糖体蛋白被认为主要参与核糖体的组装并影响细胞内mRNA翻译效率。然而近来的研究表明,许多核糖体蛋白扮演着抗癌基因的角色,并和疾病的发生密切关联。本课题以真核生物特有的核糖体蛋白RPL36为研究对象。首先将酵母菌中两个内源的RPL36基因删除,同时导入含点突变RPL36基因的质粒,使得突变的RPL36基因成为细胞内唯一的RPL36蛋白来源。我们发现一些突变能显著地影响细胞的生长及其它核糖体蛋白基因的表达。其中一些重要的突变效应包括:多聚核糖体的分布图谱有明显的不完全组装现象和许多mRNA的翻译效率发生改变。我们将检查突变对pre-rRNA的剪切、成熟和核糖体亚基组装的影响,对不同类型mRNA翻译效率的影响,以及用基因芯片检查突变对基因组表达的影响,并利用软件模拟RPL36突变对核糖体空间配置的可能效应,以期更深入地了解真核细胞核糖体的结构和功能作用机理,以及核糖体生成和细胞生长的调节网络。
RPL36B;ribosome;translational regulation;yeast;
核糖蛋白一般被认为主要参与核糖体的组装并影响细胞内mRNA的翻译效率。近年来的研究表明,许多核糖蛋白的表达状况和疾病的发生有密切关联。本课题以真核生物特有的核糖蛋白RPL36为研究对象。首先将酵母菌中两个内源的RPL36基因删除,同时导入含点突变的RPL36基因质粒,使得突变的RPL36基因成为细胞内唯一的RPL36蛋白来源。我们发现一些突变能显著地影响细胞的生长和许多代谢路径的表达。其中一些重要的突变效应包括:多聚核糖体的分布图谱有明显的不完全组装现象和许多mRNA翻译效率的改变。其中有几个代谢路径的大多数基因的翻译效率表现出明显的协调性变化特征,这现象似乎和他们mRNAs中的一些共同顺式元件有关。RPL36基因的突变对细胞内不同类型mRNA的翻译效率也有特异的影响。同时根据基因芯片的结果和分析软件的预测发现RPL36突变影响组装核糖体特定空间部位的结构。这些信息对深入了解真核细胞核糖体的结构和功能作用机理,以及核糖体生成和细胞生长的调节网络提供了重要的参考线索。