动物胚胎的发育过程是在细胞分化信息指导下按精确的时序和空间序的蛋白质表达过程。脊椎动物胚胎发育和细胞分化存在二倍体依赖性,单倍体胚胎发育可进行到一定阶段,但最终发育失败。眼睛形成期的单倍体胚胎有1/4眼睛发育正常,3/4眼睛发育畸形。本项目将通过比较蛋白质组学分析方法对具有相同基因组的雌核发育的金鱼单倍体和二倍体胚胎眼睛形成期发育和细胞分化过程的动态分析,研究分析脊椎动物胚胎发育过程二倍体依赖性在
为了了解金鱼雌核发育单倍体和二倍体早期发育的分子基础,阐明单倍体发育障碍的机制早期,尤其进一步筛选到其他导致单倍体胚胎不同眼睛发育表型的差异表达蛋白质,本工作以具有一致的遗传背景金鱼雌核发育单倍体的正常眼和无腔眼胚胎为材料, 提取色素期胚胎全蛋白,采用一维和二维聚丙烯酰胺电泳的方法进行蛋白质点的分离。然后通过MALDI-TOF-TOF和Q-TOF的MS/MS鉴定,鉴定到了一批差异蛋白质点。由于金鱼蛋白质序列和基因组数据库有限,本工作在方法学上进行改进,采用了SPITC衍生结合MS blast 搜索,提高了鉴定率。通过Western blotting实验我们还检验了部分蛋白质表达水平上的差异,结果显示,CyA,NM23以及CDC48在单倍体无腔眼中均表达下调,其的结果与蛋白质组学的结果一致。这些差异蛋白质可能在一定程度上是导致无腔眼单倍体在胚胎发育过程中眼睛发育不正常的原因,可作为与眼睛空间模式形成相关的候选蛋白质,为进一步研究单倍体的早期发育尤其是眼睛发育调控的分子机制提供有意义的材料。本工作中还建立了首个差异蛋白质组数据DEPD,发表于BIOINFORMATICS,得到国际同行关注。