弓形虫病为人和温血动物的严重共患病,疫苗免疫是有效控制本病的上佳策略,抗原和免疫途径最为关键。有效免疫必须用复合抗原,鼻腔免疫为最佳免疫途径。肠黏膜是抗感染的首道防线,肠相关淋巴组织(GALT)在抗感染中可能具重要作用。本项目提出复合抗原鼻内免疫可诱导有效的抗弓形虫感染免疫,GALT的效应部位肠上皮内淋巴细胞(iIEL)和固有层淋巴细胞(LPL)起关键作用的假设。采用复合抗原和鼻内免疫策略,用冰冻
弓形虫感染率高,引起严重人兽共患病,尚无有效治疗药物,研制安全有效的疫苗极为迫切。本课题组前期的研究证实,弓形虫复合抗原(STAg和ESA)鼻内免疫小鼠可诱导高水平的黏膜和系统免疫应答,有很强的抗感染作用。本研究采用免疫组织化学、RNA原位杂交、电镜技术等连续观察,初步明确定经口感染弓形虫速殖子的靶部位为小肠上段黏膜、靶细胞小肠上皮细胞。经弓形虫与IEC-6共培养,进一步证实了速殖子对肠上皮细胞的粘附、侵入、增殖过程。用STAg和/或ESA滴鼻免疫小鼠表明,可诱导高水平GALT免疫应答,有效阻止弓形虫侵入、播散和增殖。同时,细胞因子和抗体分泌细胞(sIgA+B 细胞)的高表达起关键作用。用相同剂量STAg(20μg)以不同途径(鼻、灌胃、皮下注射)免疫小鼠表明,滴鼻免疫诱导的黏膜免疫应答优于经口和皮下免疫。采用蛋白质组技术分析了弓形虫STAg的抗原性,鉴定出弓形虫蛋白质230个,得到的阳性蛋白16个。这些蛋白中,除主要表面抗原P30(SAG1)曾报道具有免疫原性外,其余均为本研究新发现的具有免疫原性的弓形虫蛋白,可作为弓形虫病免疫诊断和疫苗新的候选分子,有待深入研究。