中文摘要：

本项目在前一个国家自然基金资助项目研究的基础上，针对我们采用基因芯片检测技术首次发现的健脾理气明显下调大鼠肝癌表达的有关未知其全序列和功能基因的ESTs片断，进一步依次采用Northern Blot验证和比较，再以我们业已建立的大鼠肝脏和DEN诱导大鼠肝癌的cDNA库筛选出这些基因的cDNA全序列，并分别正义、反义克隆到哺乳类细胞表达载体中，再分别将含这些基因的重组表达载体电转移入体外培养传代的肝癌细胞珠中，观察转染后肝癌细胞株的生物学变化，以初步检测这些基因可能存在的功能。入选基因为40个，最终完成检测的为5-10个。本研究将进一步深入探讨中医基础理论有关治则治法理论，深入探讨健脾理气治法及其有关中药在基因表达调控方面的作用，以及中医药防治肝癌的分子机理，因而具有重要的学术意义和应用前景。

结论摘要：

本项目在基因芯片检测的基础上，对健脾理气法明显下调的有关的EST片段进行深入研究。先后应用经典cDNA文库筛选法、RACE-PCR法以及电子延伸结合PCR验证的方法，对50个EST的 cDNA序列进行克隆。将新克隆得到的基因序列与GenBank数据库进行BLAST比对、登录及有关生物信息学分析，并应用RNAi技术，对部分基因进行初步的生物学功能观察。结果（1）Northern blot与RTPCR的结果有效地验证了基因芯片检测结果；（2）成功克隆并登录19个有关EST片段的cDNA完整表达序列；（3）应用生物信息学有关知识对登录的19个新基因进行了蛋白阅读框架分析与大鼠基因组染色体定位、组织表达情况、人同源基因搜索等分析；（4）选取8个新基因的人同源基因进行RNAi实验，结果发现IFRD2、ZC3H11A、BOLA1、EIF4G2、EIF3A、CCND1等6个基因在人肝癌细胞株SMMC7721中的表达受到抑制后，肝癌细胞的生长增殖明显得到抑制。本研究为进一步探讨健脾理气法防治肝癌的分子机理做了有益的探索，也丰富了中医基础理论及生命科学的有关内容。