中文摘要：

角膜移植供体来源不足一直是眼科临床面临的一大难题。利用细胞工程和组织工程原理和技术体外重建角膜组织来代替异体角膜植片是目前研究的热点和难点。体外角膜重建的关键在于选择合适的载体支架及近似体内的培养条件，因此本课题在前期工作的基础上，应用脱细胞基质为载体和旋转培养技术体外重建全层角膜。首先进一步完善角膜脱细胞基质的制备，在旋转培养条件下将基质细胞种植于角膜脱细胞基质支架，动态培养构建角膜基质层，然后分别将内皮细胞及上皮细胞种植于基质层的内外表面，再于旋转培养系统中培养重建全层角膜，并对其进行形态学、组织学及生理功能等方面的评价，探索生物反应器内组织工程化角膜体外重建的技术和方法。

结论摘要：

角膜移植供体来源不足一直是眼科临床面临的一大难题。利用细胞工程和组织工程原理和技术体外重建角膜组织来代替异体角膜植片是目前研究的热点和难点。体外角膜重建的关键在于选择合适的载体支架及近似体内的培养条件，本课题应用脱细胞基质为载体和旋转培养技术体外重建全层角膜。首先完善了角膜脱细胞基质的制备，在旋转培养条件下将基质细胞种植于角膜脱细胞基质支架，动态培养构建角膜基质层，然后分别将内皮细胞及上皮细胞种植于基质层的内外表面，再于旋转培养系统中培养重建全层角膜，并对其进行形态学、组织学及生理功能等方面的评价，探索生物反应器内组织工程化角膜体外重建的技术和方法。同时以羊膜基底膜为载体，种植兔角膜内皮细胞，体外培养构建角膜内皮层组织，并对兔角膜进行后板层移植实验，移植前对培养的内皮细胞进行荧光标记，以追踪移植后细胞的活性及再生情况，旨在为体外培养角膜内皮层移植提供新的方法和技术，为今后角膜病角膜移植的治疗提供实验基础。