龙眼体细胞胚胎发生特异表达基因的克隆-东篱科研大数据发现系统（DRDS）

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龙眼体细胞胚胎发生特异表达基因的克隆

项目名称：龙眼体细胞胚胎发生特异表达基因的克隆
项目类别：面上项目
批准号：30471204
申请代码：C1501
项目来源：国家自然科学基金
研究期限：2005-01-01-2007-12-31

项目负责人：赖钟雄
负责人职称：研究员
依托单位：福建农林大学
批准年度：2004

中文摘要：

在已建立的龙眼体胚发生实验系统的基础上，进行龙眼体细胞胚胎发生各个阶段的同步化调控体系的优化，以获得各体胚发育阶段高度同步化的胚性培养物。采用mRNA差别显示法获得龙眼体胚发生特异表达的cDNA片段，进行特异表达基因的cDNA全长克隆、测序和同源性比较；同时，采用蛋白质双向电泳技术，分离龙眼体胚发生过程中不同发育阶段的特异蛋白，进行富集、纯化和测序，并根据测序结果设计简并引物进一步进行特异表达基因的分离。对所分离龙眼体胚发生特异表达cDNA，测序后进行比较分析，并筛选部分特异表达cDNA进行原核表达鉴定。该研究结果将初步了解龙眼体胚发生过程中特异表达基因的分布规律，加深对木本植物体胚发生机制的了解，并为植物基因工程育种提供目的基因资源。

中文主题词：龙眼;体细胞胚胎发生;特异表达基因;特异蛋白;克隆

英文摘要：

longan; somatic embryogenesis;

英文主题词： longan; somatic embryogenesis;

结论摘要：

在已建立的龙眼体胚发生实验系统的基础上，进一步扩大龙眼体胚发生的品种范围，从51份龙眼种质幼胚中诱导出胚性愈伤组织，进行筛选，获得了FEC（松散型胚性愈伤组织），进行FEC延长继代周期以及超低温保存研究，以便于长期保存胚性细胞系；进行了龙眼FEC体胚发生的同步化调控，获得了各发育阶段高度同步化的胚性培养物。采用mRNA差别显示法获得了60多个龙眼体胚发生特异表达的cDNA片段；建立了龙眼胚性培养物高分辨率的蛋白质双向电泳技术，获得了50多个发育阶段特异蛋白（或多肽）以及若干低温诱导表达蛋白，并采用PMF和串联质谱等蛋白质组学技术进行特异表达蛋白的鉴定。根据mRNA差别显示法获得的特异表达cDNA片段的测序结果以及特异表达蛋白的生物质谱鉴定结果，进一步进行龙眼体胚发生特异表达基因的分离，获得了10个基因的cDNA序列（其中8个为cDNA全长）；采用荧光定量PCR技术检测了APX和SOD等基因在体胚发生过程中的表达规律，并对APX等特异表达cDNA进行原核表达鉴定。此外，还进行了龙眼体胚发生过程中的生理生化变化分析，以进一步了解龙眼体胚发生过程中的特异基因表达规律。

成果综合统计