茉莉酸在植物界广泛存在,是植物对外来机械损伤和病虫害侵袭作出防御反应的一种伤害信号分子,在植物的防御功能和其它生理过程中起着重要的作用。我们的研究发现,外源茉莉酸可以诱导橡胶树的乳管分化并促进橡胶的生物合成,这对橡胶树的产胶过程有着重要的意义。本项目将对橡胶树茉莉酸生物合成的三个关键酶基因进行克隆,并着重研究它们表达的分子调控机理,为橡胶树新型高效采胶刺激剂的研制和基因工程技术的发展提供理论依据。
外源茉莉酸可诱导橡胶树乳管分化并促进橡胶生物合成,这一结果对橡胶树的产胶生理学研究有着重要的意义。本项目的主要内容是克隆橡胶树茉莉酸生物合成的关键酶基因,并研究它们表达的分子调控机理。根据同源克隆方法,橡胶树茉莉酸生物合成的三个关键酶,即LOX、AOS和AOC的基因已分别得到了克隆。橡胶树AOS具有3个等位基因,分别在橡胶树的不同组织中表达,树皮和胶乳表达AOS 基因cDNA的全长序列分别为1914bp和1899bp,都编码524 个氨基酸。AOC基因cDNA全长序列为949bp,编码256个氨基酸。Northern blot和酶活性分析表明,橡胶树树皮组织AOS基因的表达受茉莉酸分子的调控,在茉莉酸处理8小时后,橡胶树萌条树皮组织AOS基因的转录本及其酶活性达到最高水平,然后开始下降。启动子活性分析和基因瞬时表达研究证明,橡胶树皮组织AOS基因主要在树皮微管组织中表达,并分布于细胞质中,这与植物AOS可能定位于质体的研究结果相一致。橡胶树茉莉酸生物合成关键酶基因的克隆为将来开展橡胶树茉莉酸信号转导及其与橡胶树乳管分化和橡胶生物合成之间的关系研究奠定了一定的基础。