以精子作为载体是动物转基因的理想技术,然而,长期以来无法突破外源DNA进入精子内这一关键步骤。本研究依据精子顶体表面存在大量促性腺激素释放激素受体的特点和绿脓杆菌外毒素A转膜区可将外源蛋白跨膜转运至细胞内的特点以及超嗜热古菌组蛋白高度亲和DNA形成复合体的特点,用基因工程手段构建表达了具有这三种特性的融合蛋白GnRH-TLD-HphA(GTH),并利用超嗜热古菌组蛋白制备了其单克隆抗体,建立了GTH融合蛋白的免疫学检测方法,而后利用该融合蛋白将报告基因-绿色荧光蛋白基因高效主动地转运至细胞内,获得了绿色荧光的表达,再利用制备的GTH-DNA复合物进行了细胞和精子的转染试验,结果表明融合蛋白可以将其中的组蛋白成分和所携带的DNA转染入细胞和精子内,本课题圆满地完成了预定内容的研究。
英文主题词Cell;Sperm;transgene;fusion protein;HPhA