中文摘要：

本项目主要内容为研究羊膜上皮来源细胞诱导分化为内耳细胞的可行性。在我们的工作中，成功完成了羊膜上皮细胞的原代培养和传代培养，并且经过免疫荧光染色，Westernbolt以及RT-PCR，证明其表达Oct-4，Nanog，SSEA-4等干细胞Marker，提示其具有分化潜能。我们采用NGF和bFGF两阶段诱导分化法，反复实验均未成功诱导分化。目前已经有数篇文献报道羊膜细胞较成熟细胞更易形成iPS细胞，故尝试进行iPS细胞诱导分化为毛细胞的研究。本研究首先将iPS形成拟胚体，在悬浮培养阶段加入Wnt和BMP的抑制剂以及IGF-1，悬浮培养9天，其后贴壁培养，贴壁阶段加入促进内耳前体细胞形成的bFGF,贴壁3~4日形成花环结构，免疫荧光染色显示Pax-6阳性。实时定量荧光PCR显示Oct-4，Nanog等下降，而神经干细胞的Maker，Pax-6,Pax-2等表达在贴壁前后达到峰值，表明该诱导方法可以促进iPS细胞向神经外胚层方向分化。然而，毛细胞前体细胞Marker截至实验进行，仅有jagged1表达增加，而其他Marker并无增加，还需进一步研究。