大规模培养HeLa和Vero细胞,收获细胞,提取细胞膜蛋白组分,与JEV进行免疫共沉淀实验,再经SDS-PAGE,显示各有3条明显的特异条带,质谱分析显示均有热休克蛋白90β(HSP90β),故选择HSP90β进行进一步鉴定。 ELISA实验证实HSP90β可与JEV体外结合,激光扫描共聚焦显微镜显示HSP90β与JEV共定位于细胞膜上,表明HSP90β在细胞膜上确有存在。免疫荧光和流式细胞术实验结果也显示JEV与HSP90β的结合可被抗HSP90β抗体抑制,抑制率与抗体浓度成正比,显示出剂量依赖效应;抗HSP90β抗体可推迟JEV感染HeLa和Vero细胞后细胞病变的出现,且与抗体浓度成正比。HSP90特异性抑制剂Geldanamycin对JEV感染无明显影响。因Geldanamycin不能抑制HSP90β表达,故设计、合成了4个针对HSP90β不同位点的小干扰RNA片段,目前正对HSP90β表达抑制效果进行评价,随后将观察其对JEV感染性的影响。本研究结果显示HSP90β是灵长类动物细胞HeLa和Vero的JEV受体,为最终阐明JEV感染细胞的分子机制奠定扎实的实验基础。
英文主题词Japanese encephalitis virus; receptor; HeLa cell; Vero cell; heat shock protein 90β (HSP90β)