本研究将通过质谱分析等手段,对在我们自己建立的多药耐药细胞K562/ADR中高表达而在敏感细胞K562中基本不表达的一个新的蛋白质p34的结构进行测定及分析,并对其在部分临床标本中的表达情况等进行检测,完成对p34这一新的蛋白质的结构和表达意义的探索性研究,为进一步深入研究该新蛋白的其它各种生物学特性打下基础。
本课题首先利用串联质谱检测分析手段,对我们前期工作中发现的p34蛋白进行了鉴定分析,明确其为真核翻译起始因子3第4亚单位,表达了重组蛋白并制备了兔抗血清,转染了K562细胞研究其对K562细胞的耐药特性的影响,还收集了部分临床标本并检测了其中p34的表达,完成了对p34这一蛋白质的结构和表达意义的探索性研究,为进一步深入研究该蛋白的其它各种生物学特性打下基础。本课题还增加了对其他表达差异显著的蛋白质的鉴定,对其中的Annexin I和EF-Tu两种蛋白进行了Western blot验证,克隆它们的cDNA并构建真核表达载体,设计并克隆了它们的shRNA,分别将上述载体转染K562和K562/ADR细胞进行了耐药特性研究。整个课题研究结果显示eIF3s4的表达虽然与K562/ADR细胞的多药耐药关系并不密切,但该蛋白质翻译相关蛋白可以进入细胞核,提示这一蛋白可能具有除了与蛋白质翻译相关的其它的新的功能;而Annexin A1和EF-Tu两种蛋白均对K562/ADR细胞多药耐药特性有较明显的相关性。对上述结果进行深入研究将在肿瘤多药耐药机制及已知蛋白的新功能等有重要意义。