中文摘要：

到目前为止的研究表明，Ldh-c 在哺乳动物的精子、卵母细胞和肿瘤细胞中表达，尚未见Ldh-c在哺乳动物体细胞中表达的报道，更不清楚LDH-C4在体细胞中的生理功能和作用机制。依据我们的前期研究基础和前人的研究结果，我们认为Ldh-c不仅在高原鼠兔精子中表达，而且在体细胞中也广泛表达；Ldh-c在高原鼠兔体细胞中广泛表达，可能有利于高原鼠兔在低氧环境中维持较高的能量代谢水平，有效消除在低氧环境中无氧酵解产生的过量乳酸，增强对低氧环境的适应能力。因此，本项目通过高原鼠兔体细胞中Ldh-c的表达水平与低氧之间的关系、LDH-C4的酶促动力学特征及其在高原鼠兔体细胞中的分布和活力、LDH-C4对乳酸代谢的作用及其对高原鼠兔耐缺氧和抗疲劳作用的研究，提供Ldh-c在哺乳动物体细胞中表达的可靠依据，阐明LDH-C4对高原鼠兔适应低氧环境的特殊生理功能和作用机制，丰富动物低氧适应机制理论。

结论摘要：

为了证实LDH-C4是否在高原鼠兔体细胞中表达，通过分子克隆方法在高原鼠兔体细胞测定Ldh-a， Ldh-b，Ldh-c的序列；通过Real time PCR检测不同海拔高原鼠兔Ldh-a， Ldh-b，Ldh-c的表达量；通过原核表达系统分离纯化高原鼠兔LDH-C4，结合乳酸脱氢酶同工酶的热稳定性，利用活性染色法确定LDH-C4在高原鼠兔体细胞乳酸脱氢酶同工酶谱中的位置。应用Western Blotting和免疫组织化学方法研究了LDHC在高原鼠兔体细胞和睾丸组织细胞中的分布。结果表明1. 高原鼠兔Ldh-a 基因全长1693bp，编码区长度为999bp，高原鼠兔Ldh-a的编码区与牛，人，大鼠，小鼠，兔子的同源性分别为87.89%，88.19%，85.69%，86.29%， 88.99%和88.49%；高原鼠兔Ldh-b基因全长1299bp编码区长度为1005bp，鼠兔Ldh-b的编码区序列与牛，人，大鼠，小鼠，猩猩的同源性分别为88.46%，90.15%，86.67%，86.47%，90.15%；Ldh-c在高原鼠兔心脏，肝脏，肺，肾脏，大脑中表达，编码区与睾丸中Ldh-c的序列完全一致，高原鼠兔Ldh-c与Ldh-a，Ldh-b的同源性分别为74%和68%。2. 随着海拔高度的增加，高原鼠兔心脏中Ldh-c的表达量下降差异不显著（P>0.05）、肝脏中Ldh-c的表达量极显著下降（P<0.01）、肺组织中Ldh-c的表达量下降差异不显著（P>0.05）、肾脏中Ldh-c表达量极显著减少（P<0.01）、大脑中Ldh-c表达量下降但差异不显著（P>0.05）、骨骼肌中Ldh-c表达量极显著减少（P<0.01）、睾丸中Ldh-c的表达量下降但差异不显著（P>0.05）3. 成功构建高原鼠兔LDHC原核表达系统，分离纯化得到了具有酶活性的高原鼠兔LDH-C4。4. 通过乳酸脱氢酶活性染色法，结合乳酸脱氢酶同工酶的热稳定性，证实在高原鼠兔体细胞乳酸同工酶谱中从阴极到阳极的第三条带是LDH-C4。5. 研究结果表明，在高原鼠兔体细胞中LDHC只在胞浆中表达，而在睾丸组织细胞中LDHC不仅在胞浆中表达而且在线粒体中表达。上述结果表明Ldh-c在高原鼠兔的体细胞中表达。