中文摘要：

慢性炎症在NAFLD的病情进展中起重要作用，α7 nAChR介导的胆碱能抗炎通路抑制细胞因子的合成，控制炎症反应，但能否缓解NAFLD的炎症反应目前还没有报道。本研究首先建立NAFLD小鼠模型，检测α7 nAChR在肝巨噬细胞的表达；其次，在NAFLD小鼠给予烟碱活化胆碱能抗炎通路，通过肝脏病理和细胞因子水平观察肝脏炎症情况，细胞间接免疫荧光和Western blot检测NF-κB核移位和p38-MAPK，以明确其分子机制。最后，在α7 nAChR基因敲除小鼠建立NAFLD模型，通过肝组织病理明确α7 nAChR基因缺失对肝脏炎症的影响；同时分离肝脏巨噬细胞，分别在有无烟碱的条件下加入TNF-α以活化巨噬细胞，观察烟碱对NF-κB和p38-MAPK通路的影响，明确α7 nAChR介导的胆碱能抗炎通路抑制炎症反应的分子机制，为α7 nAChR作为可能的治疗靶分子提供理论依据。

结论摘要：

非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD）包括非酒精性单纯性脂肪肝（NAFL）、非酒精性脂肪性肝炎（NASH）及相关的肝硬化和肝癌，其中NASH是疾病谱的转折点，因其不但发生肝硬化、甚至肝癌的风险高，而且伴有较高的心血管死亡风险，目前还没有任何一种药物推荐专用治疗此病。其发病机制尚未完全明确，炎症反应是导致NASH疾病进展的重要因素。胆碱能抗炎通路主要通过活化巨噬细胞表面的α7 nAChR发挥抗炎作用，前期的研究发现体外活化胆碱能抗炎通路可以减轻肥胖诱导的炎症和胰岛素抵抗，我们推测活化α7 nAChR介导的胆碱能抗炎通路通过调控NF-κB信号通路，减轻NASH的炎症反应。为了证实上述推测，首先建立高脂高糖饮食诱导的NASH小鼠模型，分别于喂养7、11、17周后处死小鼠。病理染色结果表明随着高脂高糖饮食喂养时间的延长，小鼠肝脏组织从单纯脂肪变性逐渐发展到脂肪性肝炎。血生化和细胞因子结果表明随着喂养时间的延长，炎症程度逐渐加重。以上结果表明小鼠NASH模型造模成功。通过western及荧光共聚焦显微镜检测证实α7 nAChR在肝脏巨噬细胞的表达。其次，在NASH小鼠给予烟碱活化胆碱能抗炎通路，观察到NASH小鼠整体体重和肝脏湿重明显减轻，镜下观察到病理染色后肝脏脂肪变性程度和炎症程度均有所减轻。小鼠肝脏kupffer细胞原代分离培养,给予烟碱激活胆碱能抗炎通路，通过western blot和细胞免疫荧光发现烟碱治疗可以上调α7 nAChR的蛋白水平；通过细胞间接免疫荧光和Western blot发现给予烟碱能明显抑制NF-κB的磷酸化，抑制NF-κB的转核，从而抑制炎症通路的激活。 为进一步明确其分子机制，体外培养肝脏巨噬细胞系Raw264.7细胞，给予内毒素（LPS）处理后加入不同浓度的烟碱，结果发现LPS刺激后RAw264.7细胞内 NF-κB水平增加，I-κB水平降低，并表现出剂量依赖。加入5mM以上浓度烟碱后能明显降低 LPS 引起的NF-κB水平增加（p<0.05）。本研究证实α7 nAChR介导的胆碱能抗炎通路通过NF-κB信号通路抑制NASH的炎症反应。