前期研究工作表明,鲜壁虎提取液可显著抑制荷实体型肝癌(H22)小鼠肿瘤的生长,延长小鼠生存期,血清药理学可显著抑制人肝癌细胞HpeG2增值,诱导HpeG2细胞的凋亡,并对其抗肝癌活性成分进行了初步研究,现已申报专利。本课题拟在上述基础上,采用中药化学和中药药理学相结合的方法,探讨鲜壁虎抗肝癌的有效物质基础,利用FPLC/Purifier等多种手段进行分离、纯化,结合已建立的体内外模型,对主要部分及组分进行活性跟踪, 进而确定有效组分或有效成分;采用SDS-PAGE蛋白电泳、双向电泳等技术,进行分析检测;以质谱测定其分子量,以氨基酸序列分析仪并利用生物信息学确定氨基酸序列。以期为进一步探讨其作用机理、蛋白结构与药效活性关系等方面的研究奠定物质基础,为中药中蛋白类活性成分的研究提供方法及技术上的参考。同时对丰富祖国医学的鲜药理论及拥有我国特色的天然药物自主知识产权具有重要意义。
本项目研究发现干、鲜壁虎对肝癌均有较好的抑瘤作用且药效相近,急毒实验表明两者常规临床用量安全可靠。为寻找其抗肝癌的有效成分采用醇提、水提及硫酸铵分级沉淀方法制备了壁虎的不同分子段。结果表明醇提壁虎小分子成分和水提壁虎粗提物对肝癌移植瘤无明显抑制作用;经硫酸铵分级沉淀的壁虎不同组分体外均能抑制H22细胞的增殖,但电泳显示每个组分的蛋白条带复杂且图像相似。此外,从壁虎不同解剖部位进行的研究发现其内脏的体外抑瘤效果最为显著。跟踪国内外壁虎的最新动态制备了壁虎多糖,发现其体外也可显著抑制H22细胞的增殖。但结合体内实验却发现壁虎内脏和多糖对H22荷瘤无抑制作用,而全壁虎的抑瘤作用最佳。AKTA purfier系统快速蛋白分离显示干、鲜壁虎及其内脏成分复杂。还发现不同的炮制温度可影响壁虎的抑瘤作用,应以70℃炮制壁虎为宜。此外从血管新生和免疫调节方面探讨了壁虎抗肝癌的作用机理。研究表明干、鲜壁虎均有较好的抗肝癌作用,鲜壁虎抗肝癌效果较干壁虎无明显优势,且全壁虎的抑瘤作用明显优于不同方法提取的壁虎组分。中药抗肿瘤作用有多途径、多靶点的特点。筛选中药抗癌有效成分应体外MTT和体内肿瘤模型相结合。