中文摘要：

利用多种分子生物学技术，明确中国儿童中门冬酰胺合成酶基因变异的分布频率谱，运用高效液相色谱分析仪检测正常及肿瘤细胞内门冬酰胺合成酶酶活性，并阐明各种基因型与酶活性之间的相关性及其对疗效的影响，可望发现引起我国白血病患儿对左旋门冬酰胺酶敏感性个体间存在差异的机制，从而为避免或减轻左旋门冬酰胺酶毒副作用，并最大限度的发挥其治疗作用的个体化给药方案的建立提供理论基础；通过研究不同化疗药物的不同组合方式对不同亚型白血病细胞株作用时细胞门冬酰胺合成酶基因的表达、蛋白水平改变以及酶活性改变情况，并阐明这些变化与药物细胞毒性间相关性，将有助于更清楚的了解左旋门冬酰胺酶与其他化疗药物间的相互关系，从而为更加合理地制订与左旋门冬酰胺酶使用相关的联合化疗方案提供依据。

结论摘要：

门冬酰胺合成酶（AS）的高表达是引起细胞对左旋门冬酰胺酶（L-asp）耐药的机制之一。本研究旨在分析AS基因多态性对个体L－asp耐药的影响，通过实验阐明L-asp作用机制来寻找克服L-asp耐药的靶点，最后通过动物模型探索L-asp在髓系白血病中运用的可能性。通过RNA干扰耐药细胞AS表达逆转细胞对L－asp的耐药，证实AS是克服L－asp耐药的重要靶点；通过对近100例白血病患儿和正常对照骨髓标本AS启动子区SNP位点基因型分析和AS mRNA定量的相关分析，并体外构建插入定点突变的AS启动子片段的报道载体并检测相应各种AS启动子片段转录活性证实AS启动子区SNP变异导致基因的表达增高。通过细胞周期相关的分类基因芯片发现32种在L－asp作用中表达改变的周期相关基因；用二维电泳加质谱发现了11中差异表达的低分子蛋白；通过建立NOD-SCID小鼠腹腔单核细胞白血病（U937细胞）种植模型，给予L-Asp治疗，同时设置Ara-C、MTX和VP-16治疗的对照组，初步证实L-asp在髓系单核细胞白血病的疗效与常规髓系化疗药物相同。本课题还制备了AS特异的单克隆抗体和杂交瘤细胞。