鼠疫菌和宿主细胞之间的蛋白相互作用是其致病性的重要基础。本研究以酵母双杂交技术筛选到的鼠疫菌蛋白YopN与人蛋白TGFB1I1、LPXN作为研究靶标,深入研究YopN与两种蛋白间的相互作用,以期为深入揭示鼠疫菌的致病机制提供分子水平的证据。本研究拟首先通过GST-pull down、Co-IP等技术验证和分析YopN与两种蛋白间的相互作用和作用的结构域;鼠疫菌感染宿主细胞后分析YopN的细胞定位;细胞内过表达YopN研究其对宿主细胞粘着斑、细胞骨架、细胞凋亡、细胞免疫调节能力等生物学效应的改变;鼠疫菌经荧光标记后感染过表达LPXN、TGFB1I1的细胞,流式细胞仪分析细胞粘附或吞噬能力的改变;最后,通过关键氨基酸点突变的方法使YopN不能与靶蛋白相互结合情况下,观察鼠疫菌感染细胞后的表型改变。初步阐明该相互作用在鼠疫菌致病过程中发挥的作用,从而为鼠疫菌致病机制、预防和治疗的研究奠定基础。
英文主题词Yersinia pestis;protein-protein interaction;YopN;TGFB1I1;LPXN