中文摘要：

促性腺激素释放激素受体(GnRHR)在多种肿瘤细胞膜高表达。50%以上的实体瘤存在p53基因功能丧失。缺氧诱导因子的氧依赖性蛋白降解结构域（ODD）可加速蛋白在正常组织的代谢。原核表达GnRH-p53、GnRH-ODD-p53蛋白，利用GnRH受体识别及内在化转导p53蛋白靶向进入细胞，发挥肿瘤抑制效应，利用ODD加速蛋白常氧代谢。内容（1）原核表达p53, GnRH-p53, GnRH-ODD-p53蛋白。（2） GnRHI、GnRHIII介导p53进入细胞与细胞表面GnRHR亚型、分布的关系。（3）GnRH与p53融合蛋白进入细胞对细胞生长因子及其受体表达的影响。（4）不同氧分压下，GnRH融合蛋白细胞内重建p53 功能以及随之引起相关基因表达水平的变化。（5）融合蛋白对移植瘤动物瘤重和生存时间的作用。意义GnRH-p53，GnRH-ODD-p53可望成为肿瘤靶向治疗新型生物制剂。

结论摘要：

促性腺激素释放激素受体(GnRHR)在多种肿瘤细胞膜高表达。50%以上的实体瘤存在p53基因功能丧失。缺氧诱导因子的氧依赖性蛋白降解结构域（ODD）可加速蛋白在正常组织的代谢。本课题原核表达GnRH-p53系列融合蛋白，利用GnRH受体识别及内在化转导p53蛋白靶向进入细胞，发挥肿瘤抑制效应，利用ODD加速蛋白在常氧条件下代谢。本课题构建了pET28a-GnRH-P53系列重组质粒载体，将其转入大肠杆菌BL21后成功表达了相应的融合蛋白；经细胞免疫荧光法、细胞免疫化学法、Western blot检测表明融合蛋白可以进入GnRHR表达阳性的H1299、DU145、T47D、MDA-MB-231以及SW480细胞；经MTT法测定融合蛋白可以抑制H1299细胞的生长，并且这种作用具有剂量依赖性；融合蛋白对DU145、T47D、MDA-MB-231以及SW480细胞也具有增殖抑制作用；融合蛋白对H1299细胞的增殖抑制作用强于相同剂量的GnRH类似物亮丙瑞林和G662；流式细胞术测定表明，融合蛋白可以增加H1299细胞早期凋亡的百分率，其作用在48h最强；各融合蛋白可以诱导H1299细胞 G0/G1期细胞比例增加，而处于S期细胞的百分数减少，即发生细胞G1期阻滞；经Western blot检测，融合蛋白可以上调H1299细胞中的Caspase-3、p21蛋白表达水平，推测融合蛋白抑制H1299细胞生长的机制与活化Caspase-3蛋白诱导细胞凋亡及上调p21蛋白表达促进细胞发生G1期阻滞相关；测量、计算各组实验动物瘤体体积发现，与TC组比较GP抑制瘤体生长作用十分显著(p<0.01)，GOP、G3P、G3OP抑瘤作用较明显(p<0.05)；免疫组化方法检测荷瘤模型小鼠肝脏和肿瘤切片，发现融合蛋白主要分布于肿瘤组织中，而且给药组动物肿瘤组织切片中Caspase-3蛋白、p21蛋白、PUMA蛋白的含量较对照组高，表明融合蛋白对荷瘤模型小鼠的抗肿瘤作用主要是通过诱导肿瘤细胞凋亡和发生细胞周期阻滞而实现的；动物血浆生化指标测定结果表明，融合蛋白对动物的肝、肾功能几乎没有影响。GnRH-p53系列融合蛋白可望成为靶向肿瘤治疗新型生物制剂。