本课题组克隆得到ZBTB家族一新的成员ZBTB8A,发现该基因在胃癌细胞AGS的凋亡模型中明显上调表达。经细胞亚定位,荧光素酶报告基因转激活系统分析,证实该基因在细胞核中呈颗粒状分布,为HSE元件抑制型转录调控因子,推测ZBTB8A可能通过结合HSE元件调控HSP蛋白参与了胃癌细胞的凋亡。本研究拟采用EMSA, ChIP验证ZBTB8A与HSE元件的结合特异性;并通过ZBTB8A的过表达与RNAi下调表达,研究不同状态下AGS的细胞学功能变化;通过串联亲和层析、GST pull-down、 免疫共沉淀等方法来检测与ZBTB8A有相互作用的蛋白并验证其相互作用的真实性和生物学意义,揭示它在胃癌细胞凋亡过程中的调控机理,同时进一步分析ZBTB8A在胃癌组织中的表达变化。对该基因的功能研究具有源头创新性,为今后临床治疗和诊断胃癌提供新的思路和信息。
Zinc Finger Protein;Transcription Factor;miRNA;Expression and Regulation;
本课题组克隆得到ZBTB家族一新的成员ZBTB8A,发现该基因在胃癌细胞AGS的凋亡模型中明显上调表达。经细胞亚定位,证实该基因在细胞核中呈颗粒状分布。为了研究该基因的生物学功能,我们成功制备了ZBTB8A的多克隆抗体。通过酵母双杂交体系筛选鉴定出与ZBTB8A可能互作的蛋白因子。利用GST pull-down、 免疫共沉淀等方法来检测与ZBTB8A有相互作用的蛋白并验证其相互作用的真实性,为进一步探索这些互作的生物学意义奠定基础。受该基金资助还开展了ZNFD以及ZBTB1和ZBTB9等基因功能的研究;评估了人群中hOGG1基因Ser326Cys(rs1052133)多态性与食管鳞状细胞癌易感性的关系;利用共表达量、宿主基因和miRNA簇探索了旁系同源miRNA区分方法。受该基金资助发表SCI论文累计影响因子达12分。