本课题拟开展甘油三酯类复杂化合物分离分析新方法的研究工作,解决困扰油脂食用安全及油脂营养等研究的一大技术瓶颈。拟采用毛细管整体柱技术,设计和制备一系列阳离子交换基质的银离子整体柱分离材料,将银离子对甘油三酯化合物的识别作用和整体柱的优良性能"综合利用";基于毛细管整体柱的微体积、低扩散及高效分离等优点,耦合毛细管银离子整体柱与非水反相液相色谱分离技术,分别构建高峰容量的离线和在线的二维分离分析系统,与质谱检测相结合实现甘油三酯类复杂化合物的高选择性、高效分离分析;将所建立的技术平台应用于复杂实际样品的分析,为油脂食用安全和油脂营养研究提供技术支撑。本项目的研究将为油脂等复杂样品的高效分离分析提供新途径,对促进食品科学及生物分析等领域的研究具有重要的理论和实用价值,为推动相关产业的发展具有重要意义。
edible oil;triacylglycerols;two-dimensional liquid chromatography;profiling analysis;mass spectrometry
甘油三酯 (TAGs) 是植物油的主要成分(占95%-98%),对植物油的性质有着重要的影响。由于甘油骨架上可以结合的脂肪酸很多,导致甘油三酯的种类十分庞大,且一般天然油脂中的甘油三酯不仅物理化学性质非常接近,同时还存在着大量的同分异构体和位置异构体。因此甘油三酯的分析是一项非常有挑战性的工作。针对现有食用油识别和品质鉴定技术特异性不强的现象,本课题以植物油的主要成分甘油三酯为研究对象,开展甘油三酯类复杂化合物高效分离分析新方法的研究,以解决困扰油脂食用安全研究的一大技术瓶颈。 1. 利用基于鸟枪法(Shotgun)直接进样技术的质谱方法,鉴定了分提后所得到的微生物液态油和固态脂中的TAGs组成。结果表明,微生物液态油脂中的TAGs类型主要以三不饱和型为主(UUU),而固态脂中TAGs类型则主要以二不饱和型为主(SUU),二者各自所占的比例分别为40.5%和41.3%。方法无需样品前处理,方便快捷,可用于高通量TAGs类化合物的分析。 2. 发展了一种非水反相与银离子高效液相色谱联用的离线二维体系(2D-HPLC),并结合大气压化学电离(APCI)质谱(MS),完成了对TAGs的定性定量分析。这种方法能有效提高峰容量,成功分离更多的TAGs,然后根据APCI-MS的谱图信息来确定TAGs的结构。对MS和HPLC的条件分别进行了优化,验证了异构体的碎裂机理,并且建立了一种内标法定量分析TAGs。将该体系应用到花生油样品上,共鉴定了包括位置异构体在内的48种TAGs结构,并完成了其定量分析。该方法简单实用,在食品安全和油脂营养方面有着极为重要的地位,可用于多种食用油中TAGs的结构分析。 3. 制备针对甘油三酯高效分离的具有混合色谱保留机理的新型单柱二维液相色谱固定相,并构建单柱二维液相色谱-质谱的高通量、高选择性、高效分离分析系统。 4. 将所建立的甘油三酯轮廓谱分析技术平台结合化学计量学技术,用于主要食用植物油甘油三酯轮廓谱数据库的构建,并探寻不同植物油的特征甘油三酯组成,为植物油生产、加工、储藏、销售中食用安全研究提供技术支撑。