本项目以3细胞型白榆花粉为材料,研究了白榆生活精细胞分离和保存;研究了多种因素对白榆精细胞活力保存的影响,以及建立了适宜的白榆精细胞分离与保存程序。白榆花粉在浅层液体—固体培养基上萌发后,用渗透压冲击法分离精细胞,经Percoll或蔗糖密度梯度离心纯化,精细胞获得率可达2.0?0(6)个/ml。BSA有利于白榆生活精细胞的分离和保存,BK溶液或钙离子诱导精细胞聚集,对生活力无显著影响。pH值在5.5-7.0范围内,对精细胞生活力也无显著影响但影响BK或钙离子对精细胞的聚集作用。TUNEL检测表明Ca(2 )诱导精细胞发生细胞程序性死亡。在室温和4℃保存过程中,精细胞活力和细胞结构发生明显变化。液氮下保存是精细胞最佳保存方法。
英文主题词Ulmus; sperm isolation; viability; BSA; Tunel labeling.