中文摘要：

从单分子及单碱基水平研究DNA聚合酶反应动力学已成为探讨DNA聚合酶机理及发展单分子DNA测序技术的重要基石。在保持DNA聚合酶活性的前提下降低其催化反应速率对于更加清晰方便地识别和理解酶分子反应动力学具有重要意义。本项目从调整单分子DNA聚合酶在固定化过程中活性位点朝向的不同入手，基于零模波导表面消逝波原理在单碱基水平研究不同空间位阻效应与单分子酶反应动力学的关系，拟通过优化固定位点实现在保持酶分子活性前提下降低其反应速率的目标。具体为通过理论计算和基因突变技术研究DNA聚合酶分子不同空间位点的生物素化方法; 利用化学修饰方法在零模波导固定单分子DNA聚合酶，并研究提高单分子酶在阵列零模波导中占有率的技术方法; 通过表征零模波导中单分子荧光数据分析酶反应动力学，总结不同空间位阻效应与反应动力学的关系。本项目将为进一步研究DNA聚合酶分子反应机理及单分子DNA测序提供理论及技术基础。