中文摘要：

雄激素受体（AR）作为核转录因子是前列腺癌（PCa）发生、发展的驱动基因, 因而针对AR的内分泌治疗是当前PCa的主要方法；但大部分患者因逐渐失去对激素的敏感性而进展为激素非依赖性前列腺癌（AIPC）。近期发现AIPC不需要雄激素，但仍与AR有关。因此，寻找能阻断AR表达或抑制其活性的新基因或信号通道成为研究AIPC的关键。我们发现DACH1是内源性AR 抑制因子，参与性激素信号通路，在PCa中发挥重要的作用。因此，提出假说在PCa进展过程中DACH1缺失或Six1过表达，导致细胞周期调控因子（myc, cyclin D1, 等）和自分泌因子（TGF-beta，IL-8）的表达失常，从而引起或加剧PCa激素非依赖性增殖，侵袭和转移。本项目拟明确DACH1/Six1调节AR信号的分子机制及探讨它们在Pca发生发展及侵袭转移中的作用，探索表观遗传学药物诱导DACH1表达来治疗PCa 的可行性。

结论摘要：

Retinal determination gene network(RDGN)包括DACH，EYA和SIX三个关键成员。在组织的分化和器官发育过程中，RDGN基因网络成员间协同作用，控制细胞的增殖和凋亡。前期研究发现DACH1拮抗雄激素（DHT）介导的前列腺受体（AR）的转录激活和前列腺癌细胞的增殖。本课题探索RDGN网络对AR活性的调控及其在前列腺癌发生、发展的作用。报告基因检测发现EYA1抑制AR转录活化，与HDACs和SirT1有协同抑制效果。而SIX1对AR的转录活化无作用。稳定表达EYA1和SIX1能增加多个人前列腺癌细胞系的克隆形成，提示EYA1和SIX1促增殖作用不依赖于AR。异位表达DACH抑制AR阳性、激素非依赖的C4-2、22RV1和AR阴性的PC-3细胞的体外增殖和小鼠体内的成瘤能力。DACH1抑制Cyclin A, E的mRNA表达和Cyclin A,E 启动子转录活性。此外，DACH1抑制PC-3细胞的迁移和侵袭和多种细胞因子的表达，包括IL-6、IL-8和CXCL1。DACH1通过AP-1蛋白，抑制IL-6、IL-8 启动子转录活性。分析Oncomine数据发现DACH1在前列腺癌组织中表达低于正常组织，且与IL-6、IL-8成反向关系。癌基因（Ras, Myc, Src和NeuT）转化的前列腺上皮细胞和其移植瘤组织中内源性Dach1的表达被抑制，伴随Cyclin E, Cyclin A上调。而且，癌组织中DACH1mRNA表达与CXCL1，CXCR2，IL-6成反比。为明确DACH1对特定癌基因致瘤作用的影响，在单一癌基因（Ras,Myc,Src或NeuT）转化的前列腺上皮建立稳定表达DACH1的亚系。小鼠种植实验表明DACH1抑制各种癌基因转化的前列腺细胞的成瘤作用。为分析Dach1的生理作用，建立小鼠前列腺组织特异性Dach1基因敲出模型。组织分析显示内源性Dach1缺失增加前列腺细胞增殖（Ki-67)和Cyclin A和Cyclin E的表达，活化IL-6和KC等细胞因子的分泌，但减低细胞凋亡。此外，aza-CdR诱导PC-3细胞内源性DACH1的表达， 提示通过药物激活DACH1抑制前列腺癌生长的可能。总之，我们的结果表明RDGN基因网络参与AR的信号转导，在前列腺癌变的发生、发展过程中起重要作用。