中文摘要：

侵袭性曲霉病（IA）的发病在免疫受损患者中不断增多且危害严重。患者应用免疫抑制剂造成的免疫功能受损是IA发病的主要原因。巨噬细胞是宿主防御烟曲霉感染的重要细胞，其表达的模式识别受体dectin-1、TLR2、TLR4是宿主识别烟曲霉的主要受体。本人在既往研究中首次发现环磷酰胺可抑制肺组织dectin-1、TLR2表达，而对TLR4 表达无显著影响。这可能与环磷酰胺促进侵袭性曲霉病发展有关。目前，免疫抑制剂对巨噬细胞的免疫调控机制尚不清楚，本课题在既往研究的基础上进一步研究免疫抑制剂环磷酰胺、地塞米松对巨噬细胞功能的影响，探讨该影响与模式识别受体dectin-1、TLR2、TLR4的相关性；研究在烟曲霉感染过程中免疫抑制剂对模式识别受体信号传导通路的影响及与受体的相关性。对这些问题的阐释将进一步揭示免疫抑制剂对细胞功能影响的作用机制，并为今后开展免疫调控防治IA奠定基础。

结论摘要：

侵袭性曲霉病（IA）的发生呈现上升趋势，且病情十分严重。应用免疫抑制剂后造成免疫功能受损是IA发生的主要原因。巨噬细胞是宿主防御真菌感染的重要细胞，其受体Dectin-1、TLR2是宿主识别烟曲霉的主要受体。本课题研究免疫抑制剂环磷酰胺、地塞米松对细胞功能的影响与Dectin-1、TLR-2的相关性；烟曲霉感染过程中免疫抑制剂对受体信号传导通路的影响及与受体的相关性。采用荧光定量PCR方法检测地塞米松、环磷酰胺作用小鼠巨噬细胞后感染烟曲霉对受体dectin-1、TLR2 mRNA表达的影响；利用基因芯片方法检测环磷酰胺、地塞米松作用巨噬细胞后感染烟曲霉，细胞受体通路各基因表达变化；dectin-1、TLR2 基因敲除小鼠及野生型小鼠骨髓巨噬细胞经环磷酰胺、地塞米松作用后进行细胞吞噬实验，计算吞噬指数（PI）。结果表明地塞米松、环磷酰胺均对细胞dectin-1、TLR2 mRNA表达有抑制作用。细胞加菌24小时后，dectin-1、TLR2 mRNA表达受到抑制。地塞米松、环磷酰胺作用细胞后加入菌，dectin-1、TLR2 mRNA的表达受到更强抑制。基因芯片结果表明，环磷酰胺可引起巨噬细胞TLR2、CARD9、TRAF6表达下降；烟曲霉感染24h后引起巨噬细胞TLR2、TRAM1、TBK1 、SYK、CARD9、TRAF6表达下降；环磷酰胺作用细胞48h后感染烟曲霉24h引起dectin-1、SYK、TLR2、MYD88 表达下降。dectin-1及TLR2基因敲除小鼠骨髓巨噬细胞吞噬功能下降，PI下降分别87%、76%。地塞米松作用细胞24h后抑制dectin-1及TLR2基因敲除小鼠骨髓巨噬细胞吞噬功能，PI下降为57%、46%。环磷酰胺作用细胞48h后抑制巨噬细胞吞噬功能，PI下降为62%、54% 。由此得出地塞米松、环磷酰胺可抑制受体dectin-1、TLR2及其相关信号传导通路因子表达。烟曲霉感染抑制Dectin-1、TLR2及其相关信号传导通路因子表达。Dectin-1、TLR2 与巨噬细胞吞噬功能相关。本研究深入揭示了免疫抑制剂环磷酰胺、地塞米松可通过抑制模式识别受体及其相关信号传导通路因子的表达抑制巨噬细胞功能。该作用可能促进IA发生发展的原因之一。本研究进一步揭示了免疫抑制剂引起IA的发病机制，为今后研究免疫调控防治IA具有重要意义。