中文摘要：

国内外研究和我们前期结果均显示神经元内apoE4水解片段apoE4(1-272)才是真正的致AD病变分子，可导致tau蛋白异常磷酸化。近来发现内质网应激(ERS)发生于AD神经元纤维缠结早期。我们前期结果显示神经元内apoE4(1-272)可诱发ERS。内质网-高尔基体运输是细胞内蛋白质质量控制系统关键环节之一，有赖于微管的稳定性。因此提出神经元内apoE4(1-272)可能通过tau蛋白异常磷酸化而影响小泡运输、高尔基体募集等重要环节阻滞内质网-高尔基体运输，进而诱发神经元ERS。拟在前期建立的四环素可调控apoE4(1-272)表达的N2a细胞系中，运用激光共聚焦、电镜、荧光漂白等技术，研究神经元内apoE4(1-272)导致tau蛋白异常磷酸化，进而对内质网-高尔基体正向运输的影响。为深入研究apoE4(1-272)对神经元重要细胞器功能、活动的影响提供依据。

结论摘要：

apoE4基因是最常见的AD易感基因，众多国内外研究均提示神经元内ApoE4蛋白的水解片段ApoE4(1-272)可能是真正的致AD病变分子，但机制仍不清楚。内质网-高尔基体运输是细胞内蛋白质质量控制系统的关键环节之一，有赖于微管的稳定性。近来发现内质网应激(ERS)发生于AD神经元纤维缠结早期。 N2a细胞中无ApoE4基因，因此我们通过建立Dox可调控apoE4(1-272)表达的N2a细胞系—N2aTeton/apoE4(1-272)，证实了ApoE4(1-272)在细胞内的堆积可诱发N2a细胞发生ERS；并检测到内质网-高尔基体运输的标记物CPY在内质网及高尔基体中堆积；扫描电镜观察到高尔基体破碎现象。这些结果提示ApoE4(1-272)片段可导致N2a细胞发生内质网-高尔基体运输障碍进而诱发ERS。进一步的实验表明ApoE4(1-272)片段的堆积，导致N2a细胞中总tau含量及tau磷酸化程度显著增加，采用GSK3抑制剂LiCl可显著抑制tau磷酸化程度及缓解ERS，而CDK5抑制剂Roscovitine无显著作用。 综合上述结果，我们认为神经元细胞内apoE4(1-272)的堆积，可上调tau蛋白及主要通过激活GSK3β使tau过度磷酸化，从而阻滞内质网-高尔基体运输，进而诱发ERS。