在我们已有研究结果的基础上,本研究拟利用我们分离和克隆的番茄乙烯反应因子家族中的抑制子LeERF3 和活化子LeERF5基因转化番茄,获得目标基因超表达和沉默的转基因番茄株系,分析其抗病性、抗逆性及果实成熟等的表型变化;通过对转基因番茄材料进行病原菌接种及多种环境胁迫试验,研究LeERF3和LeERF5与番茄抗病性及抗逆性的关系;并通过Northern分析和定量PCR等方法,研究转基因番茄中抗病性、抗逆性及果实成熟相关基因的表达变化,深入研究LeERF3和LeERF5的作用机理。本研究不仅可以阐明番茄LeERF3和LeERF5基因的功能,而且对探讨乙烯在植物生长发育及环境胁迫中的调控机理具有非常重要的意义,为利用基因工程技术改良作物的抗病性、抗逆性提供理论依据。
本研究分离和克隆了番茄乙烯反应因子家族中的抑制子LeERF3 和活化子LeERF5基因,对这两个基因进行了表达分析分析了LeERF3和LeERF5基因在果实的不同发育阶段的表达情况,以及多种胁迫环境(如淹水、高低温、干旱、伤害等)和番茄突变体(Nr、rin、T4B等)对LeERF3和LeERF5表达的影响,发现LeERF3基因在果实发育的早期表达非常高;利用CaMV35S启动子构建了超表达载体,利用农杆菌介导法转化番茄子叶外植体,分别获得了目标基因超表达和协同抑制的转基因番茄株系;分别克隆了受番茄乙烯信号转导途径调控的抗性基因Pin2、PR1、PR2、PR4、PR5、PR6和PR-NP24等,分析它们在转基因株系中的表达变化;对转基因番茄材料进行病原菌接种及多种环境胁迫试验,研究LeERF3和LeERF5与番茄抗病性及抗逆性的关系,研究转基因番茄中抗病性、抗逆性及果实成熟相关基因的表达变化,深入研究LeERF3和 LeERF5的作用机理。本研究阐明了番茄LeERF3和LeERF5基因的功能,而且探讨了乙烯在植物生长发育及环境胁迫中的调控机理。