为分离鸡性别决定及性分化相关基因,本研究采用抑制消减杂交方法构建了性分化早期雌、雄鸡胚cDNA消减文库,并结合斑点杂交技术筛选了性别差异表达基因,用RT-PCR和WISH方法研究这些基因的时空表达谱,对筛选的重要候选基因进行RNAi及超表达研究。研究结果表明,从雌、雄文库中筛选的cDNA分别代表了46和55个性别差异表达基因,其中已知功能基因分属于DNA水平、RNA水平、酶类、信号转导因子等类别;克隆了两个性别差异表达新基因- - 在染色质水平上起调控作用的HMG-14A(F071)和位于Z染色体的非编码RNA分子(A041)的全长;分析的46个性别差异表达基因中大部分(雌85.29%,雄91.67%)为真实差异表达,根据表达谱结果将SMARCE1、Cdk2ap1等在两性生殖嵴或性腺表达差异大的基因作为深入研究的候选基因;通过优化种蛋开窗、载体转染、效果检测等技术,建立了鸡胚中进行功能研究的平台,并利用RNAi和超诱导表达技术初步研究了ASW、DMRT1、SMARCE1的表达。本研究筛选的性别差异表达基因和开展的基因功能研究工作为深入研究鸡的性别决定与性分化调控机制奠定了坚实基础.
英文主题词chicken; sex determination; sex differention; gene; subtracted cDNA library