中文摘要：

复苏促进因子（Rpf）的研究对揭示原核细胞的生长周期及调控规律，筛选和利用新的微生物资源有重要意义。革兰氏阴性菌中仅报道沙门氏杆菌能产生Rpf。我们首次发现C. hutchinsonii能产生类似Rpf的活性物质并在其基因组中检索到类Rpf的基因CHU_0099。PCR克隆该基因并在大肠杆菌中成功表达，表达产物有促进贫瘠状态下老化变形的哈氏嗜纤维菌生长的作用。该菌缺乏合适的遗传操作系统，自杀质粒转化效率低难以实现基因敲除。我们提出利用可复制质粒进行基因定点敲除的策略，首次构建了能在该菌中进行复制的质粒pSKL08；并成功实现了对该菌的电击转化，在此基础上获得Rpf缺失突变株。突变株的生长状态明显弱于野生型，表明Rpf对菌体的生长有重要意义。进一步利用复制质粒获得CHU_0099超表达的转化子，转化子菌落形成能力明显减弱。依据以上结果我们建立了通过补充C. hutchinsonii培养物从环境中富集筛选VBNC状态噬纤维菌的方法，为开发利用新的菌种资源提供帮助。本课题对该菌遗传体系的完善不仅促进了对类Rpf的研究，也为深入研究该菌的其他基因功能奠定了基础。