前期从患肌肉白浊症状的罗氏沼虾幼虾体内分离到两种RNA病毒颗粒,并克隆了这两种病毒的部分基因组cDNA序列。其中,一种为27nm左右的、具诺达病毒特征的颗粒,一种为15nm左右的未知小病毒颗粒,二者同时感染罗氏沼虾幼苗的肌肉组织和结缔组织。本项目在此基础上,首先用蔗糖密度和氯化铯密度体度超离心方法分离纯化两种病毒,将两种病毒同时和单独感染罗氏沼虾幼苗,确定两种病毒对罗氏沼虾幼苗的感染特性及其相互关
本项目获得了以下主要研究结果(1)测定了MrNV和XSV中国分离株全基因组序列。(2)用蔗糖和氯化铯密度梯度离心纯化了这2种病毒,并分别或混合感染罗氏沼虾幼苗。对感染后的幼苗进行肌肉白浊症比例和基因组拷贝数进行定量PCR测定后显示,含高浓度MrNV低浓度XSV的病毒悬液感染组出现了较高比率的感染症状,含低浓度MrNV高浓度XSV的病毒悬液感染则只有极少数幼虾出现白尾症状。高浓度MrNV感染组的基因拷贝数显著高于低浓度MrNV感染组。表明MrNV是引起罗氏沼虾白尾病的主要病原。MrNV和XSV基因组拷贝数线性关系显示,XSV是以来于MrNV的卫星病毒。(3)利用昆虫杆状病毒表达系统研究了MrNV的RNA聚合酶基因和XSV基因组的复制关系,从分子水平上证实XSV是依赖于MrNV的卫星病毒。(4)利用昆虫杆状病毒表达系统确定了XSV结构蛋白CP17和CP16的形成是同一基因组独立翻译的结果。同时发现CP17和CP16分别能在大肠杆菌内能可溶性表达,并形成相似的二十面体的类病毒颗粒,而类病毒颗粒的形成与CP17和CP16的羧基端相关,氨基端缺失将影响类病毒颗粒的大小和包装RNA的能力。