我们成功构建了枯草芽孢表达载体工程菌(Pus186-cotC-WB600),构建的枯草芽孢表达工程菌可以携带外源基因融合表达于枯草杆菌表面,创造了本课题组研究益生菌口服疫苗的技术平台。通过生物信息学技术分子我们从cDNA文库和华支睾吸虫囊蚴cDNA文库筛选了5个肝吸虫口服疫苗候选分子,半胱氨酸蛋白酶、丝氨酸蛋白酶抑制剂及3个肝吸虫表膜蛋白,并将相关编码基因克隆入表达载体,先后获得大肠杆菌/枯草杆菌表达体系的融合蛋白,融合蛋白免疫动物获得抗血清后进行免疫荧光及流式细胞仪检测证实融合蛋白成功表达于芽孢表面。在我们模拟的胃肠道环境中,对枯草杆菌芽孢作为口服疫苗载体进行耐性评估,实验结果证实芽孢融合蛋白在体外胃肠道模拟环境中具有较好的稳定性,枯草芽孢载体融合蛋白经口服途径和腹腔注射途径免疫大鼠后可以产生较强的体液棉业和细胞免疫反应,提示将枯草杆菌芽孢作为益生菌疫苗经口服途径免疫后可以引起良好的肠道黏膜反应,可以作为终宿主和中间宿主易于接受的抗肝吸虫病疫苗。
英文主题词Clonorchis sinensis;gene;bacillus subtilis;vaccine