中文摘要：

前期工作表明，龟板可诱导MSC转分化为神经细胞，在此基础上，利用神经发育基因BMP深入研究龟板高效诱导MSC定向分化为多巴胺能神经元，应用RNAi干扰BMP4启动子技术和TH启动子荧光素酶报告基因系统构建，并观察龟板成分对其转录活性的影响，获得足够治疗PD新的种子细胞。依据肾主骨、生髓、通脑的中医理论，TH、GFP双基因系统构建及在MSC表达及植入PD模型大鼠纹状体内，应用免疫组化、原位杂交技术研究其增殖和神经分化以及神经功能评估，为临床PD治疗后多巴胺能神经元的补充和修复探索新的途径，具有极其重要的理论意义和巨大的社会需求与市场价值。

结论摘要：

重复注射6-OHDA建立帕金森病动物模型。于左侧大鼠黑质致密部(SNC)和中脑腹侧被盖区（VTA）分别注射6-OHDA，一周后在相同位置重复注射同剂量6-OHDA，动物行为检测和免疫组化结果均表明，通过二次打击建立帕金森病动物模型成功率高于一次打击。龟板有效成分（PTE）促TH表达。成功构建TH启动子驱动的荧光素酶（Luc）报告基因，用报告基因和pGL3载体共转染P19细胞，发现PTE能增强TH启动子的转录活性，且表现出正性的量效关系；Western Blotting检测显示，PD大鼠纹状体内TH表达显著减少，PTE治疗后TH表达升高，说明PTE可促进PD大鼠纹状体TH的表达。免疫组化显示，PTE治疗后黑质TH表达升高，且有明显的浓度依赖关系。龟板促MSC向神经元分化与BMP4表达上调有关。龟板治疗PD大鼠诱导MSC向神经元分化，同时ELISA、RT-PCR检测显示，龟板促PD模型大鼠血清、黑质和纹状体BMP4mRNA和BMP4的表达增高。体外培养实验结果显示，龟板含药血清和PTE以浓度依赖方式促进MSC的BMP4mRNA及BMP4蛋白的表达，这种高表达可能与龟板的促增殖作用有关。