对血小板反应素-1(TSP-1)TSR3基序的基因进行克隆、碱基序列分析,基因表达载体构建、基因表达、目的蛋白纯化。进而开展TSR3目的蛋白与肺巨噬细胞表面受体CD36特异结合检测及体外观察该目的蛋白阻断TGF-β1活化的作用效果,同时在肺纤维化动物模型体内进行该目的蛋白阻断TGF-β1活化及阻抑肺纤维化发生发展的效果观察。为更有效地阻抑肺纤维化的发生发展及临床上的应用奠定实验基础。
应用RT-PCR、基因重组、Western blot和生物纯化等分子生物学实验技术,对血小板反应素-1(TSP-1)TSR2-3基序的基因进行克隆、表达及目的蛋白纯化,成功获得纯化的TSR2-3/TSP-1融合蛋白产物;应用细胞免疫荧光方法证明该目的蛋白与巨噬细胞表面受体CD36发生特异性结合;应用细胞免疫荧光和ELISA方法体外观察该目的蛋白、TSR3功能片段及CD36抗体对肺巨噬细胞分泌的L-TGF-β1的活化具有明显抑制作用;在肺纤维化动物模型体内,给予高、低不同剂量的TSR3功能片段,发现其对肺泡灌洗液中L-TGF-β1活化具有抑制作用;通过测定肺组织中羟脯氨酸含量、病理观察(HE、VG染色)和应用免疫组化方法测定肺组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白含量,均证明TSR3功能片段可抑制肺组织内胶原蛋白的合成,具有阻抑肺纤维化发生发展的作用。本课题探明了TSR3/TSP-1无论在体外或体内实验中均对L-TGF-β1的活化具有明显抑制作用;TSR3/TSP-1在肺纤维化动物模型体内也具有明显的阻抑肺纤维化发生发展的作用,这为阻断TGF-β1活化阻抑肺纤维化的机制研究提供了实验依据。