埃及伊蚊浓核病毒AeDNV属短浓核病毒属,可特异性感染蚊子类,具有蚊虫生物防治的潜在价值。为增强其杀虫效果发展其为生物杀虫剂,我们将东亚钳蝎昆虫毒素BmK IT1插入包含野生AeDNV全基因组的质粒载体pUCA中,C'末端融合表达绿色荧光蛋白GFP为示踪分子,构建成可表达蝎毒蛋白的重组病毒表达载体。重组病毒载体与野生病毒表达载体共转染包装细胞-白纹伊蚊C6/36细胞获得重组病毒。qPCR法定量病毒,以重组病毒引入白纹伊蚊幼虫孳生水体感染幼虫,以野生病毒为对照,评估各组半数死亡时间LT(50) 和半数致死量 LD(50),结果显示重组病毒对白纹伊蚊具有更有效的杀伤效果。我们进一步测试AeDNV作为RNAi载体的能力与其应用于蚊媒控制的潜在效果,白纹伊蚊V-ATPase基因作为靶基因,将特异性siRNA表达框插入重组病毒,构建成表达siRNA的重组病毒载体,使用重组病毒载体转染C6/36细胞,qPCR测定V-ATP基因抑制率 于96 h达到90% 以上。重组病毒感染白纹伊蚊幼虫,幼虫体内V-ATPase 抑制率达到70% 以上,幼虫死亡率相对于野生病毒对照组显著性升高。
英文主题词Aedes aegypti densovirus(AeDNV);Biopesticide;Buthus martensii Karsch insect toxin(BmK IT1)