中文摘要：

课题组前期研究首次发现并报道了HBc蛋白的表达可使肝癌细胞抵抗TRAIL诱导的凋亡，提出HBc蛋白可能是参与HBV感染慢性化及肝细胞肝癌发生的重要因素。通过对稳筛HBc转染株与野生株基因芯片差异表达研究，我们首次发现HBc转染可明显下调抑癌基因DLC-1的表达。为进一步深入研究HBc蛋白是否通过影响DLC-1的表达，参与了HBV相关HCC的发生。本课题拟以稳定表达HBc蛋白的肝癌细胞和对照细胞，研究HBc 下调DLC-1表达，是否影响DLC-1激活蛋白Rho A、Cdc42及下游效应蛋白的表达，以确定HBc对DLC-1抑癌活性的影响。并通过检测HBc对DLC-1基因启动子区CpG岛甲基化的影响和启动子区的调控，深入探讨HBc 对DLC-1表达调控的分子机制。研究将为HBV相关HCC的发病机理及临床干预提供可靠依据。

结论摘要：

课题组前期运用表达谱芯片，筛查出HBc 可影响DLC-1的表达。那么运用Real-time PCR、Western blot 等技术，将HBc 真核表达载体转染BEL7402、HepG2细胞系，验证了基因芯片的结果，即HBc可下调DLC-1 的表达。为避免转染实验的人工假象，设计针对HBc的反义片段，转染HBV整合的肝癌细胞系HepG2.2.15，进一步反向验证了HBc可下调DLC-1 的表达。进而，在HBc表达细胞系的生物活性研究中，提示HBc可以通过增强细胞迁移而促进肝癌细胞恶性行为。结合以上研究结果，我们提出假说HBc可能通过影响DLC-1的表达，从而影响细胞迁移，参与了HBV相关HCC的发生。为了深入探讨这一假说以及HBc下调DLC-1的分子机制，课题组从两方面入手，进行机制的探讨。即HBc对靶向DLC-1的microRNA的影响和对DLC-1基因启动子区的甲基化的影响。 ①在HBc对靶向DLC-1的microRNA的影响的研究中，运用HBc转染的microRNA芯片和多个microRNA比对网站的分析，我们发现并验证了3个靶向DLC-1的microRNAhsa-miR-382-5p， hsa-miR-19b-3p，hsa-miR-766-3p。通过正反验证，最终发现HBc可通过上调hsa-miR-19b-3p的表达，从而靶向抑制DLC-1的表达，参与了肝癌细胞转移增强的恶性生物学行为。 ②在对HBc影响DLC-1甲基化的机制研究中，通过查阅文献及其软件分析，设计合成针对DLC-1基因启动子区CpG岛甲基化检测引物，MS-PCR法检测HBc前后，DLC-1基因启动子区甲基化情况。结果显示，HBc蛋白增加了DLC-1的CpG岛甲基化水平，5-氮杂能部分逆转DLC-1的甲基化水平。 课题组从两个方面深入探讨HBc对抑癌基因DLC-1的影响，结果提示HBc可能通过下调抑癌基因DLC-1的表达，参与了促进肝癌发生的重要作用。其具体机制①HBc通过通过上调hsa-miR-19b-3p，从而靶向抑制DLC-1的表达；②. HBc蛋白增加了DLC-1的CpG岛甲基化水平,从而抑制了DLC-1的表达。本课题的研究结果将进一步深入阐明HBV相关HCC发生的分子机制，为HBV相关疾病的治疗筛选有效靶位是新的治疗靶标。