中文摘要：

K-RAS基因突变是胰腺癌的主要早期分子事件，本课题拟对靶向抑制K-RAS基因的microRNA（miRNA）分子进行全面系统性的鉴定和功能学研究。首先结合文献并利用生物信息学技术预测和筛选能够作用于K-RAS基因的miRNA分子，并在胰腺癌细胞及组织中进行靶向作用及表达水平的验证，其次在胰腺癌细胞中检测它们对肿瘤生物学行为的影响，确定胰腺癌中能够作用于K-RAS基因且具有功能的miRNA分子，进而研究它们在时间和空间上如何变化及对K-RAS表达的影响和其在肿瘤演进中的作用。我们前期已发现了miR-96和217能靶向抑制K-RAS基因，并能明显抑制胰腺癌的恶性行为。本课题在此基础上全面分析胰腺癌中靶向抑制K-RAS基因的miRNA分子及其网络，研究结果将初步阐明胰腺癌中miRNA参与调控K-RAS基因的分子致病机理，为miRNA分子应用于胰腺癌的基因治疗提供坚实的理论基础和必要的实验依据。

结论摘要：

本课题按研究计划对靶向抑制K-RAS基因的microRNA（miRNA）分子进行了全面系统性的鉴定和功能学研究。我们完成了能够作用于K-RAS基因的miRNA分子的预测和筛选，并在胰腺癌细胞及组织中进行靶向作用及表达水平的验证，其次在胰腺癌细胞中检测它们对肿瘤生物学行为的影响，确定胰腺癌中能够作用于K-RAS基因且具有功能的miRNA分子。在原来基础上更加全面分析胰腺癌中靶向抑制K-RAS基因的miRNA分子及其网络，研究结果将初步阐明胰腺癌中miRNA参与调控K-RAS基因的分子致病机理，为miRNA分子应用于胰腺癌的基因治疗提供坚实的理论基础和必要的实验依据。在计划的实施过程中，我们筛选了多个与KRAS相关的miRNA分子进行研究，在对miR-193b的研究中证实了其能够靶向抑制KRAS来调控胰腺癌细胞的生长，同时发现它的靶基因不仅仅限于KRAS编码基因，对长链的非编码基因也有靶向作用，因此我们也对此进行了深入的研究；另外，有些miRNA分子是通过其他的分子间接的作用于KRAS，例如他们靶向于AKT2分子进而影响KRAS基因，我们也对其进行了验证和功能学分析；当然，对于筛选出来的这些miRNA分子的研究还在继续，比如一些分子，在胰腺肿瘤中的表达水平以及功能学实验已经完成，但是靶基因的鉴定和验证仍在继续。除此之外，在对胰腺癌中靶向抑制K-RAS基因的研究中，我们还拓展了研究范围，利用靶向敲减KRAS癌蛋白的融合性泛素连接酶E3 来抑制胰腺癌细胞体内外生长，并且取得了一定成果。本研究不仅超额完成了原计划内容，还进一步扩展并在相关领域取得了重要发现，发表国内核心期刊论文3篇，国际期刊论文9篇，其中发表在国际刊物上的论文均被SCI 收录（影响因子最低的为2.634，最高的达8.459）。资助项目执行期间共培养博士后1名，博士研究生8名，博士研究生均已顺利毕业答辩。本研究课题组成员参加了中华医学会病理学分会2012至2015年学术年会，会议投稿若干篇；另外课题组长应邀参加了国际会议5次并做大会发言，与国内外学者进行了广泛的交流。综上所述，本课题进展顺利，已基本完成了预期目标，取得重要成果。特别是在原研究计划的基础上，我们还扩展了新的内容，找到了新的研究增长点，需要在本研究基础上申请新的课题深入研究，希望今后能够得到进一步的资助。