本课题针对克隆重编程中核-质互作的关键问题,以活体取卵(OPU)获得的遗传背景清晰、经PCR-RFLP对线粒体DNA进行分型的牛卵母细胞进行核移植,开展以下研究比较不同线粒体单倍型卵母细胞与供核细胞不同组合的克隆效率;对同型和异型克隆胚的全基因组H3K9的甲基化程度进行比较,以分析表观遗传修饰对不同来源胚胎发育中的可能影响;在此基础上,对发育过程中的关键因子如Oct4、Nanog和Sox2等在不同来源胚胎中的DNA甲基化程度进行比较分析,进一步建立了单胚胎极微量RNA抽提技术平台,建立同体、同型和异型克隆不同时期的胚胎cDNA文库,并利用包含23,000多个牛转录本的Affymetrix芯片对单胚胎的基因表达谱进行分析,并得到了基因表达谱聚类结果,初步筛选出差异表达基因,系统地探讨表观遗传修饰对克隆胚胎发育的作用机理。
英文主题词Mitochondrial DNA haplotype; somatic cell nuclear transfer; cytoplasm-nuclear interaction; Donor-Host compatibility; microarray