γδT淋巴细胞是首先接触抗原的一线防御细胞,在启动过敏性炎症反应中有特殊的意义。本项目拟通过过敏原检测筛选有特异过敏原的哮喘病人。用荧光标记的单克隆抗体通过流式细胞仪分析哮喘患者外周血及气道内γδT细胞的亚群克隆性;用过敏原选择性扩增γδT淋巴细胞,通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和基因扫描技术测定TCR Vδ和Vγ主要亚群在外周血及气道内的表达和克隆性,并对其进一步行CDR3区cDNA片段的亚克隆及测序。目的在于探讨γδT细胞亚群在哮喘气道炎症中的作用,TCR特异性序列与过敏原之间的关系,及气道慢性炎症产生或迁延不愈的病理机制,为提出预防及治疗这一疾病的新策略提供理论和实验依据。
γδT淋巴细胞在启动过敏性肺部炎症反应中有特殊的意义。本项目通过支气管肺泡灌洗获得哮喘病人肺泡淋巴细胞,应用免疫磁珠进行分离、纯化,流式细胞仪分析γδT细胞的亚群,过敏原选择性扩增γδT淋巴细胞,通过基因扫描技术测定TCR Vδ表达和克隆性。发现哮喘病人肺组织中有较多的γδT淋巴细胞(P<0.05),过敏原能够部分刺激γδT淋巴细胞增殖,基因扫描测定结果显示TCR受体δ基因CDR区为多克隆。同时我们制备了粉尘螨提取液CXCR3-/-基因敲除小鼠肺部变应性炎症模型,研究了γδT细胞的作用,发现致敏的小鼠肺组织呈明显变应性炎症病理改变;灌洗液中嗜酸性粒细胞数明显升高(P<0.01);灌洗液和淋巴细胞培养上清IL-4明显升高(P<0.01 ),IFN-γ明显降低(P<0.01);γδT淋巴细胞部分增加。而作为对照的致敏野生小鼠嗜酸性细胞较少,各项指标较低。说明γδT淋巴细胞、CXCR3受体可能在哮喘的发病过程中发挥重要作用。