中文摘要：

食管鳞癌是常见的恶性肿瘤，但其发病机制不详。TP53INP1是一种重要的抑癌基因。前期研究中我们发现c-myc能结合TP53INP1启动子并招募DNA甲基转移酶DNMT3A，导致局部染色质DNA的超甲基化，抑制染色质开放，下调TP53INP1表达，促进食管癌的形成。近年来，分子生物学技术的不断更新日益彰显出非编码RNA的重要性，但其功能基本不详。本课题尝试从这一崭新视角审视食管癌发病的分子机理。申请人在前期工作中又发现，TP53INP1在基因组上的定位被一条152kb的长链非编码的反义转录本C8orf38所覆盖，封闭其表达能够显著增加TP53INP1的表达水平。本项目拟对C8orf38的基因结构、表达模式进行表征，通过体内外实验解析其与肿瘤发生的可能关系，着重探讨C8orf38对TP53INP1启动子结构的抑制作用与分子机制，以及C8orf38与myc之间存在的可能的协同关系。本项目的完

结论摘要：

食管鳞癌是我国常见恶性肿瘤之一，但其发病机制仍不明确。TP53INP1在食管癌形成过程中起到重要抑癌作用，前期研究发现TP53INP1表达可被其反义转录本C8orf38所调控。本研究中C8orf3在食管癌组织高水平表达，患者生存期显著低于低表达者；且 C8orf38与TP53INP1在食管癌组织表达呈负相关，提示C8orf38可通过抑制TP53INP1发挥促癌作用。为进一步揭示C8orf38对TP53INP1的调控机制，在食管癌细胞EC-1、EC-109及EC9706中对C8orf38进行反义封闭后，TP53INP1启动子开放、启动子区域的组蛋白出现H3K4Me3及H3K36Me3开放状态修饰，启动子去甲基化明显增强。同时，将C8orf38-TP53INP1双启动子报告载体统导入食管癌细胞中发现完整片段C8orf38与TP53INP1双向转录时，可明显抑制TP53INP1的表达，而缺失C8orf38片段后，TP53INP1转录抑制作用消失，证实C8orf38可通过反义封闭抑制TP53INP1启动子活性。鉴于C8orf38可通过影响TP53INP1启动子染色质结构影响其转录活性，是否还可招募染色质结构重塑小体相关因子，共同影响TP53INP1启动子开放状态。在食管细胞中干扰若干染色质结构重塑小体相关因子，经染色质免疫沉淀技术（ChIP）以及RNA免疫沉淀技术（RIP），证明CHD4可同时结合TP53INP1启动子区域以及C8orf38转录本，且干扰CHD4后，TP53INP1转录增加，提示CHD4是C8orf38作用TP53INP1的共因子。前期研究中食管癌细胞内c-myc结合TP53INP1启动子，下调TP53INP1表达。c-myc是否也是C8orf38作用TP53INP1的共因子。但干扰c-myc后并未影响C8orf38对TP53INP1的调控，同时共转反义C8orf38，并未发现c-myc结合TP53INP1发生改变，提示c-myc与C8orf38对TP53INP1调控相互独立。综上所述，C8orf38在食管癌中高表达，通过结合染色质重塑因子CHD4共结合TP53INP1启动子区域，改变其染色质结构，促进DNA甲基化，发挥促癌作用；抑制C8orf38可显著减弱食管癌细胞活性。C8orf38可作为食管癌预后的生物标记物，是理想的基因治疗靶点。