中文摘要：

蛋白激酶A（PKA）在血小板生理功能中起重要调控作用。以往研究中，申请者发现短暂抑制PKA的活性，使得血小板结合VWF的功能增加；而延长抑制PKA活性的时间，则导致血小板重要粘附受体GPIb alpha膜外功能区被酶切，使得GPIb alpha依赖的血小板功能减低；而且，初步结果提示PKA抑制还可导致血小板膜内侧磷酯酰丝氨酸（PS）外翻并释放出微颗粒（MP）。本研究中，我们将阐明PKA调控GPIb alpha膜外功能区酶切的机制；研究证实PKA在调控血小板PS外翻和MP释放中的作用。由于GPIb alpha膜外功能区的酶切可导致血小板生理功能减低，PS外翻和MP释放则促进血液凝固，因而，本研究不仅有助于认识，血小板血栓形成后并没有无限制增大的机理和血小板参与凝血的机制，而且，利用该机制，主动调控GPIb alpha的酶切或PS外翻和MP释放，还为设计新型抗血栓、出血药物提供一条全新思路。

结论摘要：

蛋白激酶A（Protein Kinase A, PKA）在血小板生理功能中起重要调控作用。以往研究中，我们发现短暂抑制PKA 的活性，使得血小板结合VWF 的功能增加；而延长抑制PKA 活性的时间，则导致血小板重要粘附受体GPIbα膜外功能区被酶切，使得GPIbα依赖的血小板功能减低；而且，PKA 抑制还可导致血小板膜内侧磷酯酰丝氨酸（PS）外翻并释放出微颗粒（MP）。血小板被激活参与止血和血栓形成的过程，虽已得到充分认识，但是，关于负调控血小板在血栓形成过程中的作用和机制所知甚少。本项研究阐明，PKA在调控GPIbα膜外功能区酶切中的机制PKA抑制剂通过调节胞内钙离子释放，调控calpain活性，calpain位于ADAM17上游，并通过调控反应氧族(Reactive oxygen species , ROS)的产生，调节血小板GPIbα的酶切，使相应血小板的功能降低；血小板内细胞骨架以calpain非依赖的方式参与调控GPIbα酶切。研究证明，PKA活性的抑制使得血小板内膜PS外翻，同时血小板表面膜收缩形成微颗粒并释放出来，两者都起到促凝作用。此外，我们还对PKA 抑制与其他因素导致GPIbα被酶切的机制间的关系进行了研究，结果显示，生理或病理情况下，血小板凋亡和GPIb α酶切同时且相对独立发生，使相应的血小板功能降低。由于血小板PKA抑制所造成的钙离子浓度升高等细胞内反应，是血小板对多种生理、病理刺激的普遍反应，本研究揭示，血小板PKA活性被抑制后，通过ADAM17调控GPIbα膜外功能区的酶切，阻止血小板血栓形成的机理。因而，本研究不仅有助我们认识在生理或病理条件下，血小板形成血栓起到止血功能后，血栓并没有无限制增大，或在体内血小板被激活形成血栓的倾向，但并没有形成血栓的机理，而且利用该机制，主动调控GPIbα膜外功能区的酶切，从而为我们设计新型抗血栓、出血药物提供了一条全新思路。同时，PKA在调控血小板膜内侧PS外翻和MP释放中作用的研究，为我们认识PKA在调控血小板参与凝血过程的机制，并利用该机制调控血小板在凝血过程中的作用奠定基础。