酚氧化酶原激活系统(ProPO-AS)是对虾等甲壳类动物固有免疫系统的重要组分,但ProPO-AS激活会引起黑变,是对虾冷藏期间品质劣变的主要原因。本研究以ProPO-AS关键性组分丝氨酸蛋白酶(SP)为突破口,鉴于SP空间分布的组织特异性,采用细胞免疫化学和透射电镜技术跟踪SP在冷藏期间的组织迁移变化。继而采用激光共聚焦偶联酶活检测跟踪冷藏期间组织内Ca2+浓度、SP活性和ProPO激活程度的动态变化,分析变量之间的相互关系;同时通过免疫亲和技术从对虾中分离SP和ProPO,构建包含主要组分的体外激活模型,揭示冷藏期间SP介导的ProPO激活规律。进而运用紫外、荧光和圆二色等光谱技术和电泳技术解析对虾冷藏期间ProPO的分子构象和聚集行为,结合系统活性状态,探讨SP介导的ProPO激活机制。本研究不仅可为对虾冷藏期间的黑变靶向抑制提供理论依据,而且将深化对ProPO-AS的理论认识。
英文主题词L. vannamei;cold storage;melanosis-related endogenous enzymes;biochemical mechanism;targeting inhibition