中文摘要：

TRE17癌基因异常表达导致细胞恶性转化和肿瘤形成。然而，其机制尚不清楚。TRE17癌基因间接结合Rac1和Cdc42，介导其细胞骨架肌动蛋白重塑。前期工作表明，在钙离子存在下，TRE17特异性直接结合CaM。鉴于CaM可通过MLCK/MLC途径和TM/CaD途径调节肌动蛋白重塑，本项目将用分子生物学、细胞生物学及蛋白质分析技术，从研究TRE17与CaM相互作用入手，在基因、蛋白、细胞和整体等多个

结论摘要：

正常细胞向肿瘤细胞恶性转化是一个非常复杂的多阶段的过程，涉及多种癌基因和抑癌基因的遗传和表遗传改变。细胞骨架重塑在细胞恶性转化中非常重要。用酵母双杂交等方法，我们发现MLC2可能是癌基因TRE17的结合蛋白，参与调节TRE17诱导的细胞骨架肌动蛋白重塑。本研究用RT-PCR方法从HeLa细胞中克隆了人MLC2 cDNA；用pGEX蛋白表达系统大量制备了MLC2,TRE17和TRE17同源体PRC17等蛋白，并初步分析了TRE17与MLC2相互作用的生物学意义。癌基因PRC17是Rab5的GAP蛋白。在用PCR方法构建了PRC17 GAP活性区单点突变体PRC17(R107P)和双点突变体PRC17(R107P,D148H)以及PRC17羧基端截短突变体PRC17(164)，PRC17(353)和PRC17(476)后，我们以HA-pcDNA3空载体为阴性对照，将PRC17及其突变体分别稳定转染NIH 3T3细胞。软琼脂试验表明，除PRC17的GAP活性区域的107位精氨酸和148位天门冬氨酸外，其氨基酸165-353区域可能在细胞恶性转化功能中也具有重要作用。