中文摘要：

流感在中医属外感热病的范畴，临床上以清热解毒为治疗常规。颜德馨老中医认为流感非独为热毒，亦有寒毒为病，倡导寒热并用的治则。前期临床及实验研究已经表明寒热并用复方在外感热病临床治疗中疗效肯定，在流感动物模型中能有效抑制病毒复制及降低免疫损伤。本项目拟从代谢组学和TLR相关信号转导通路两条途径来诠释寒热并用法的在流感细胞及动物模型中发挥的药"性"与药"能"的作用机制。以TLR7/MyD88/TRAF6/NF-κB信号通路为阐明寒热并用法"药能"的切入点；以HPLC-TOF/MS生物信息学技术作为诠释寒热并用法调控代谢途径的"药性"为手段，从整体到局部立体地评价寒热并用法在流感治疗中的配伍机制，为外感热病寒热并用法治则的确立提供更多的依据。

结论摘要：

流感在中医属外感热病的范畴，临床上以清热解毒为治疗常规。颜德馨老中医认为流感非独为热毒，亦有寒毒为病，倡导寒热并用的治则。前期临床及实验研究已经表明以九味羌活汤加减制备的寒热并用复方在外感热病临床治疗中疗效肯定。本项目从代谢组学和TLR相关信号转导通路两条途径来诠释寒热并用法发挥的药“性”与“能”的配伍机制。研究结果表明采用代谢组学方法鉴定了13个差异的代谢产物，证实了小鼠在病毒感染后，花生四烯酸、氨基酸、脂肪酸代谢途径发生显著变化，寒热并用方能有效纠正代谢紊乱，但不能区分寒热并用与单纯寒性药的差别，说明代谢组学不是揭示复方配伍机制的敏感方法。在H3N2流感病毒感染小鼠巨噬细胞的模型中，黄芩中活性成分黄芩苷能保护病毒直接诱导的细胞损伤，改善细胞代谢，干预细胞代谢的差异物质主要围绕TCA cycle, 糖代谢，乳酸以及几个常见氨基酸，证实了复方活性成分黄芩苷的保护机制。采用分子生物学手段，借助重症诱导肺损伤模型，证实了寒热并用方能显著提高小鼠的生存率，减轻肺损伤，抑制病毒诱导机体的免疫过度激活，其机制与抑制了炎症因子/趋化因子的过度活化及招募，调控TIR7介导的NFκB炎症信号通路有关，但寒热并用方与单纯寒性药在炎症信号通路的调控上趋势相，只存在显著性的差别。因此，虽证实了该复方的有效性，但运用系统生物学思想的代谢组学及信号通路的研究方法并不能有效区分寒热并用法与单纯寒药方的药物配伍机制。因此从成分入手，探求了复方中两个重要的活性组分黄芩苷和鱼腥草多糖抗病毒及抗炎的作用机制，为后续的成分配伍研究奠定基础。研究结果表明活性成分黄芩苷，对流感病毒H3N2感染肺上皮细胞及小鼠巨噬细胞诱导自噬体的积累有显著的抑制活性，并伴有p-mTOR活性增强，作用位点在mTOR的上游通路。鱼腥草多糖在流感病毒诱导致死肺损伤模型中有显著保护作用，可减轻肺间质内充血、水肿及淋巴细胞、单核细胞等炎性细胞的浸润，提高生存率；抑制炎性细胞因子/趋化因子等的释放；抑制NF-κB p65的激活。证实鱼腥草多糖是鱼腥草主要活性成分，治疗甲型流感病毒诱导小鼠肺损伤的机制主要是通过抗炎途径来实现的。总之，本研究阐释了寒热并用方治疗流感病毒诱导肺损伤的代谢以及抗炎通路的保护作用机制，同时证实了方中主要的活性成分黄芩苷、鱼腥草多糖的抗病毒、抗炎活性机制，为后续的成分配伍机制研究奠定基础。