选用自然生长于青藏高原地区的2-3种高山龙胆科植物进行原生质体分离和培养,在建立起原生质体高频率分裂和再生植株的基础上,进行高山龙胆科植物与栽培药用植物种秦艽(Gentiana macrophylla)的原生质体融合,通过亲本遗传互补原理筛选和培养异源融合杂种细胞,产生种间或属间体细胞杂种愈伤组织,并诱导再生。继而从形态学、细胞学、生化和分子生物学上对杂种愈伤组织和再生植株进行真实性鉴定,并在愈伤组织和植株水平上比较杂种与亲本对于低温的耐受能力,分析它们的一些抗寒生理生化指标,研究抗寒性状在体细胞杂种中的表现。开展这一研究,对利用高山植物遗传资源以及对高山植物抗寒遗传性状的转移具有重要的理论和实践意义。
Alpine plant;Tissue culture;Protoplast culture;Somatic hybridization;Cold-resistant characteristics
高山植物是一类生长于树线以上至雪线的山地植物。长期以来,由于自然选择的结果,高山植物大多具有抗极端环境胁迫,尤其是抗低温胁迫的遗传特性。本研究以自然生长于青藏高原地区的4种高山植物唐古特莨菪(Anisodus tanguticus)、川西獐牙菜(Swertia mussotii)、线叶龙胆(Gentiana farreri)和麻花艽(Gentiana straminea)为实验材料,在建立起它们的组织培养和原生质体培养再生体系的基础上,尝试通过体细胞杂交将高山植物的抗寒性状转移到陕西地区栽培药用植物种秦艽(Gentiana macrophylla)中。主要研究结果如下(1)建立了一套适用于高山植物组织培养的培养条件,如将培养温度由常规的25℃降到20℃,采用昼夜不同温度培养等;(2)建立了唐古特莨菪和川西獐牙菜的快速繁殖体系;(3)建立了川西獐牙菜和线叶龙胆的器官发生再生体系;(4)建立了麻花艽的体细胞胚发生再生体系;(5)建立了麻花艽和秦艽的细胞悬浮培养体系;(6)建立了麻花艽和秦艽的原生质体培养再生体系;(7)建立了高山植物离体再生苗遗传稳定性鉴定的ISSR体系;(8)建立了麻花艽核失活和秦艽质失活体系;(9)通过PEG介导,进行了高山植物麻花艽和陕西地区栽培药用植物种秦艽的体细胞杂交,获得再生愈伤组织,通过形态、细胞、生化和分子鉴定证实了杂种愈伤组织的真实性,并对其抗寒遗传性状进行了研究。该研究对保护和利用高山植物遗传资源具有重要的理论和实践意义。