中文摘要：

肿瘤干细胞逃避手术及化疗药物的杀伤导致肿瘤复发和转移，是肿瘤难以治愈的根本原因之一。分选、鉴定胆管癌干细胞，并阐明其分子生物学机制，对攻克胆管癌具有重要的意义。我们的前期研究发现CD24+CD44+EpCAMhigh胆管癌细胞为胆管癌成瘤的关键细胞，并具有自我更新和分化等干细胞样特性，可能为胆管癌干细胞。我们将在此研究基础上，对CD24+CD44+EpCAMhigh细胞进行耐药及侵袭转移相关标记蛋白的检测和联合分选，并对其进行功能分群，进一步明确胆管癌干细胞表面标记蛋白和分析其生物学特性，特别是初步阐明其多药耐药特性；通过检测ABC家族等经典耐药途径，以及运用基因芯片技术筛选胆管癌干细胞特异性基因位点，初步揭示胆管癌干细胞的多药耐药分子机制。胆管癌干细胞的分离鉴定及其生物学特性的研究，不仅有助于阐明胆管癌发生、发展机制，还有望发现胆管癌根治性治疗靶点，为新药研发提供理论基础。

结论摘要：

肿瘤干细胞是近年来研究的热点，大量研究已经证实肿瘤干细胞是肿瘤恶性生物学特征的载体。在前期工作基础上，通过本项目研究，我们进一步验证了CD24+/CD44+/EpCAMhigh和CD133+的胆管癌细胞具有干细胞样特性，其与胆管癌的侵袭、远处转移及多药耐药性相关。通过对高纯度的胆管癌干细胞进行差异基因及相关表面蛋白的芯片筛选，发现miR-200b/c是胆管癌干细胞的重要的差异表达microRNA，其在胆管癌组织中呈显著的低表达，且其表达水平与患者的病理分化程度相关。通过后续研究，我们验证了miR-200b/c可抑制胆管癌细胞体内外侵袭、迁移、远处转移；可有效的增加胆管癌细胞对5-氟尿嘧啶的化疗敏感性；可以抑制胆管癌成瘤、克隆形成，并减少胆管癌细胞膜表面CD133的表达量。最后，我们通过机制及通路研究，证实了miR-200b/c是通过miR-200b/c-ROCK2-LIMK-Cofilin和ZEB1/2-E-Cadherin通路共同影响胆管癌的侵袭转移能力，二者具有协同性；miR-200b/c通过SUZ12影响胆管癌干细胞效应。我们在本研究项目中虽然通过一系列的研究证实了miR-200b/c是胆管癌干细胞特性的相关基因，并验证了其发挥干细胞生物学效应的通路，这将更加丰富肿瘤干细胞的理论。