本研究基本按原计划顺利进行,并在银杏2n花粉秋水仙素诱导率极低的相关机理研究中有了新的突破。试验发现银杏小孢子母细胞囊壁和母细胞壁膜都不能阻碍秋水仙素进入银杏小孢子母细胞内,其原生质也不会破坏秋水仙素的化学结构。经高效液相色谱检测发现银杏小孢子母细胞蛋白与秋水仙素作用瞬间结合形成了一个结构稳定的缔合物并且其构象发生了一定程度的变化。通过免疫荧光染色与普通细胞染色观察,发现经秋水仙素处理的银杏小孢子母细胞出现了明显的减数分裂缓慢甚至停滞现象,部分细胞无法形成纺锤体。通过将秋水仙素处理银杏小孢子母细胞前后蛋白双向电泳图像对比分析,我们发现了6个差异蛋白点,推测秋水仙素诱导银杏2n花粉的过程可能受蛋白间相互作用的影响。在本项目的资助下,完成有关论文10篇,授权专利1项,申请专利4项,培养研究生4名,2名研究人员职称得到晋升。今后还应重点深入研究在秋水仙素处理过程中银杏小孢子母细胞的非正常发育情况出现的原因及其对秋水仙素诱导银杏2n花粉的影响、进一步探索银杏小孢子母细胞蛋白相互作用及其与秋水仙素相互作用对诱导银杏2n雄配子的影响以及银杏雌配子加倍的诱导方法和机理,扩展银杏三倍体植株培育途径。
英文主题词2n pollen of Ginkgo biloba L.; meiosis; colchicines inducing; microtubule; protein