中文摘要：

血管平滑肌（VSMC）增殖是诸多心血管疾病的核心病理变化，MAPK通路是调控其过程的主要信号通路。Egr-1是一种核转录因子，通过激活PDGF-A和Cyclin D1等下游分子促进细胞增生。碘化N-正丁基氟哌啶醇（F2）是本课题组合成的专利化合物，前期我们证实F2具有阻断钙通道和抑制Egr-1的作用。本项目在初步实验结果显示F2抑制机械损伤后VSMC的增殖率，使细胞周期停滞于G0/G1期以及抑制PDGF-A表达的基础上，（1）全面观察F2对离体细胞和整体动物血管平滑肌增殖的抑制作用；（2）采用反义寡核苷酸技术和药理学的手段，确证Egr-1高表达与VSMC增殖的因果关系以及MAPK通路对Egr-1表达的调控作用和关键激酶位点；（3）观察F2对MAPK通路及关键激酶的作用，阐明F2抑制VSMC增殖的机制是通过MAPK调控的Egr-1信号通路。通过本项目的实施，进一步拓展F2心血管活性的研究。

结论摘要：

本项目是对本课题组自主创新的专利化合物碘化N-正丁基氟哌啶醇（F2, 国家发明专利号ZL96119098.1）进行研发的系列工作之一。项目采用培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞（VSMC）离体模型和兔颈总动脉内膜球囊损伤整体动物模型，全面观察F2对离体和整体动物VSMC增殖的抑制作用及其机制。（1）通过CCK-8法检测VSMC增殖率，流式细胞仪检测细胞周期分布，5-BrdU掺入检测DNA合成等方法，证明F2对机械损伤致VSMC增殖具有明显的抑制作用；（2）采用Western-blot，实时定量PCR和siRNA干扰以及工具药等手段，确证了Egr-1高表达与机械损伤致VSMC增殖的因果关系；确定MEK/ERK/Egr-1途径参与机械损伤后VSMC增殖过程；（3）F2明显抑制机械损伤后VSMC中MEK/ERK的活化，降低p-MEK/ERK、Egr-1蛋白和mRNA的高表达；（4）F2能抑制兔颈总动脉球囊损伤后新生内膜厚度、新生内膜面积、新生内膜面积/中膜的面积及管腔的狭窄程度，以及组织增殖细胞核抗原的表达，证明F2能抑制整体动物VSMC增殖和实验性血管再狭窄。以上结果证明了F2通过MAPK调控的Egr-1信号通路抑制VSMC增殖。本项目的实施，拓展了F2心血管活性的研究，为F2的研发提供新的作用靶点，并进一步积累了药理学证据。 本项目认真执行研究工作计划，完成了项目的研究内容，取得的预期的研究结果和目标。本项目通过确证Egr-1高表达与机械损伤致VSMC增殖的因果关系，以及阐明MEK/ERK/Egr-1途径参与机械损伤后VSMC增殖过程，进一步丰富VSMC增殖机制的理论探讨，具有一定的理论意义及科学价值；确定了F2通过抑制MAPK调控的Egr-1信号通路抑制血管平滑肌增殖，进一步拓展F2心血管活性的研究和新的作用靶点，具有实用意义及应用前景。 本项目正式发表SCI收录论文1篇，国家核心统计源期刊2篇，省级学术期刊1篇。目前仍有一批数据待整理发表，拟在项目结题1-2年内继续发表SCI收录论文2篇，国家核心统计源期刊2篇。本项目培养毕业硕士生2名，目前仍有1名硕士生将于2013年6月毕业。研究生的论文“碘化N-正丁基氟哌啶醇抑制血管平滑肌细胞增殖作用及机制”参加广东省药理学会2011年学术年会，获得大会交流优秀论文。