中文摘要：

本项目是基于我们收集到15个完整的中国"常染色体显性遗传夜发性额叶癫痫（ADNFLE）"家系及200例散发病例。目前国外已鉴定证实的三个ADNFLE致病基因（CHRNA4、CHRNB2、CHRNA2），仅覆盖家系及散发病例的极少部分，提示可能存在其它ADNFLE致病基因。鉴于前期研究显示ADNFLE家系患者nAChR基因突变筛查结果与国外报道不同，仅存在两个基因（CHRNA4、CHRNB2）的同义突变，未发现国外已报道的错义突变或缺失突变。本项目拟在现有的工作基础上运用全基因组扫描连锁分析及群体易感性关联分析方法进行致病基因逐步精细定位及定位区域内基因的突变筛查，鉴定出中国ADNFLE的致病基因。一旦这项研究获得成功，将克隆出代表中国ADNFLE人群基因背景的新致病基因，有助于进一步揭示中国ADNFLE的发病原因与病理机制，为疾病的早期诊断及药物开发提供科学依据和新靶点。

结论摘要：

本研究严格按照2001年国际抗癫痫联盟（ILAE）对癫痫与癫痫综合征分类诊断标准，收集到268例，包括15个家系，共53例家系患者和215例散发病例，及200例健康对照。对所有病例及健康对照筛查已鉴定证实的三个ADNFLE致病基因（CHRNA4、CHRNA2、CHRNB2），未发现已报导的错义突变或缺失突变，在CHRNA4和CHRNB2各发现一个同义突变及6个SNP，同义突变在200例健康对照中未发现相同改变。因此，我们推测CHRNA4、CHRNA2、CHRNB2可能不是中国人群ADNFLE主要致病基因，一定另有更重要的致病基因。我们选取一个4代发病共7名患者的大家系，选择4个表型典型且一致的患者，及8例表型典型的散发患者应用全基因外显子组高通量测序，捕获新的候选致病基因，并采用Sanger测序进行验证。在家系7名患者及1名未发病家系成员中，发现其编码钙连接蛋白4蛋白基因CaBP4一新杂合错义突变（p.G155D），该位点在国内外尚未见报道，在200例健康对照组进行CaBP4基因全部外显子直接测序筛查未发现突变，其余家系及215例散发病例中亦未见该突变。通过与NCBI数据库比对发现上述突变位于灵长类哺乳动物CaBP4基因序列高度保守区，SIFT预测分数为0.00，说明突变对蛋白结构有较大影响；二级结构分析突变点紧邻CaBP4蛋白结合离子结构域，在200名健康对照中为阴性，推测CaBP4基因可能为常染色体显性遗传夜发性额叶癫痫新致病基因。我们对8名散发患者进行高通量测序结果分析，未发现共有的突变位点，但在其中一名患者发现CHRNA7基因第5外显子突变，在健康对照中验证后为cSNP，分析CHRNA7基因编码的α7亚基是中枢神经系统中分布最多的两种受体亚型之一，然后我们对215例散发ADNFLE患者CHRNA7基因全部外显子筛查，未发现突变，在第5、6、7外显子发现3个cSNP及2个SNP。本项目应用全基因外显子组高通量测序，采用PCR产物直接测序法对新的基因位点进行突变筛查，7名患者及1名未发病家系成员中，发现期编码钙连接蛋白4基因CaBP4一新杂合错义突变（p.G155D），推测CaBP4基因可能为常染色体显性遗传夜发性额叶癫痫新致病基因。这一新发现有助于进一步揭示中国ADNFLE的发病原因与病理机制，对该病的研究提供新的科学依据。