中文摘要：

不同科属病毒间在动物体内发生基因重组的频率是很低的,重组病毒需有特殊的生物学优势才能在庞大的病毒群体中保存并成为流行毒株。 本项目将以我们独有的一株带有REV-LTR的天然重组马立克氏病毒野毒株GX0101为模型，阐明重组病毒在动物群体中演化为流行毒株的选择性优势及其分子机制。利用已结题项目中成功构建的GX0101株的BAC克隆和敲除了REV-LTR插入序列的BAC克隆的优势，将二个分子克隆化病毒同时接种鸡并在体内连续传代，通过对二个病毒在血液和羽囊上皮中含量的动态比较来证明插入的REV-LTR片段确能提高MDV横向传播性，并可成为在鸡群中不断演化的病毒群体中的竟争优势。利用微芯片技术分析这一对病毒不同基因及感染鸡不同基因的差异性表达，以及对 REV-LTR插入位点下游的SORF2 基因表达水平的比较，揭示REV-LTR插入序列改变马立克氏病毒天然重组病毒传播性和致病性的分子机制。

结论摘要：

为阐明整合网状内皮增生病毒(REV)LTR的天然重组马立克氏病毒(MDV)野毒株GX0101演化为容易分离到的流行株的分子机制,用人工染色体克隆技术,构建了GX0101的克隆病毒及其REV-LTR敲除株GX0101ΔLTR。将二病毒以不同比例混合后接种1日龄鸡，再将第2批1日龄鸡置入同一隔离器混和饲养，连续接触感染2-3代，比较观测二个MDV的横向感染性。通过能对这2株病毒作鉴别的荧光定量PCR，比较跟踪了这2株MDV在同一个体内的复制动态上差异，特别是同一鸡体和鸡群内相互间的消长规律。这一模仿自然感染的试验表明，即使以1/10的比例与GX0101ΔLTR同时感染同一鸡群每一只鸡，经过2-3代自然横向感染，带有REV-LTR的GX0101能在鸡群中几乎完全取代最初感染量高10倍的GX0101ΔLTR。这证明插入REV-LTR显著提高了重组GX0101横向传播性，这是它在鸡群中从比例极低的状态不断演化成流行毒株的竞争优势。本研究完成了GX0101株的约178KB大小小的全基因组测序。利用微芯片技术，阐明了REV-LTR插入片段对MDV及其感染细胞不同基因的差异性表达，插入LTR导致14个MDV基因上调10倍以上，1个基因显著下调。插入REV-LTR使其直接下游的SORF2基因表达增强399倍，而敲除SORF2使病毒感染性下降。该研究为进一步揭示影响MDV传播性和致病性的分子机制提供了新的信息。已发表论文3篇，另3篇起草中。